天津市女性MTHFR、MTRR 基因型和等位基因频率分布.docVIP

天津市女性MTHFR、MTRR 基因型和等位基因频率分布 　　出生缺陷(birth defects，BD) 是我国严重的公共卫生问题和社会问题，每年新增出生缺陷约90 万例。叶酸摄入不足或不能被机体有效利用是导致出生缺陷的主要原因。5，10- 亚甲基四氢叶酸还原酶(5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR) 和甲硫氨酸合成酶还原酶(5-methyltetrahydrofolate-homocysteinemethyltransferase reductase，MTRR)是参与体内叶酸代谢的关键酶，其基因多态性会影响体内叶酸及同型半胱氨酸水平，与神经管畸形、复发性流产、妊娠期高血压等疾病的发生密切相关，严重影响母婴健康。本研究针对天津市女性，开展流行病学调查，旨在阐明本地区人群的遗传特征，为个体化的孕期保健提供依据。 　　1　资料与方法 　　1.1　临床资料 　　选取自2012年5月至2015年5月在天津市妇女儿童保健中心进行孕前与孕期检查的健康女性，入组对象共467例，平均年龄(29.81plusmn;4.15)岁。根据知情同意原则，采集口腔粘膜细胞。 　　1.2　方法 　　利用硅胶吸附法收集口腔粘膜上皮细胞，提取样本的基因组DNA。通过荧光定量PCR 技术(仪器购于美国ABI 公司)，检测MTHFR C677T、A1298C 和MTRR A66G的基因多态性。反应体系(10 mu;l)：20 ng/mu;l DNA 模板(1mu;l)，Taqman Universal Master Mix(5 mu;l)，Taqman-MGB探针(见表1)(0.5 mu;l)，DEPC 水(3.5 mu;l)。反应条件：95℃预变性10 min，92℃变性15 s，60℃延伸1 min，20 个循环;89℃变性15 s，60℃延伸90 s，30 个循环。反应结束后在ABI7900 型荧光定量PCR 仪上读取样品孔中的终点荧光，采用分析软件SDS 2.3 确定各个样本的基因分型结果，采用Hardy-Weinberg 平衡分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G 基因多态性。 　　1.3　统计学分析 　　SPSS19.0 软件进行SNPs 的Hardy-Weinberg 平衡的统计学分析，Haplo View4.2 软件进行单倍型结构和LD 水平分析。计数资料采用率表示，对基因型及等位基因的频率进行chi;2 检验，检验水准alpha;=0.05，以P lt; 0.05 为差异有统计学意义。 　　2　结果 　　2.1　Hardy-Weinberg平衡分析 　　MTHFR C677T、A1298C 和MTRR A66G 基因多态性，检验结果符合Hardy-Weinberg 遗传平衡(chi;2 分别是0.79、0.21、2.19，P 均gt; 0.05)，表明样本具有本区域的群体代表性。 　　2.2　天津市女性MTHFR、MTRR基因型和等位基因频率与不同地区女性比较 　　天津市女性MTHFRC677T 位点的基因型频率与德阳、松滋、湘潭、昆明、惠州、南宁、琼海的差异有统计学意义(P 均lt; 0.01);A1298C 位点的基因型频率与南宁、琼海的差异有统计学意义(P 均lt; 0.05);MTRRA66G 位点的基因型频率仅与琼海的差异有统计学意义(Plt; 0.05) 　　天津市女性MTHFRC677T 位点的等位基因型频率与德阳、松滋、湘潭、昆明、惠州、南宁、琼海的差异有统计学意义(P 均lt; 0.01);A1298C 位点的等位基因型频率与南宁、琼海的差异有统计学意义(P 均lt; 0.05);MTRR A66G 位点的等位基因型频率仅与琼海的差异有统计学意义(P lt; 0.05) 　　2.3　天津市女性MTHFR C677T和A1298C两位点的连锁情况及单倍型分析 　　天津市女性MTHFR C677T 和A1298C 两位点组合情况(表2)显示，TT/AA 组合所占比例最多，达32.9%，CT/AA 组合次之，占30.8%，不存在TT/CC 与CT/CC 两种组合，具有一定的地区代表性。通过单倍型分析，结果显示，天津市女性中存在4 种组合：TA(56.5%)、CC(28.7%)、CA(14.7%)、TC(0.1%)。两位点间高度连锁不平衡(Dprime;=0.984，r2=0.22). 　　3　讨论 　　出生缺陷的发生受环境、营养和遗传因素的共同影响。作为参与体内叶酸代谢的关键酶，MTHFR C677T 和A1