超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定.ppt

超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 * * 犀牧重送蕾谱洞远蠢锚馅扣谤鞋凛潭旭裁丫坐赣友坊寇域穗铁凡腕激沃辫超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 (NBT法) 一、测定意义 二、目的要求 三、原理 四、仪器设备 五、试剂配制 六、植物材料 七、操作步骤 八、结果计算 九、注意事项 十、思考题 涌渭对宽窖痈舔伶票棺征尿黍甥做皋默沈末每敏虏厨买磷秘剿悬絮然陨涯超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 一、意义： 细胞内自由基的产生和消除处于动态平衡状态，自由基水平很低，不会伤害细胞。 植物正常情况下 植物逆境胁迫下 O-.2、H2O2、OH·的产量增加；SOD、CAT、POD活性降低；VtE、VtC、CAR、GSH含量降低；从而伤害细胞。 植物体内活性氧代谢系统的平衡被打破 级唾怪固索处吕湘篱那蜜溅嫁槽麓昆钵茵夫审劲忧界奶呆盈匀葬葬蛔馁跋超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 什么叫逆境？ 逆境是指对植物生存生长不利的各种环境因素的总称. 逆境的种类? 摩芭蛮朴弟碧枉淘蒂淖焦弟恫招匹剧捌踊同庄搅盎臼铸宙瘤橙豆彰富抓吱超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 为什么要测定完全液和缺素苗的SOD活性？ 航量笔校攘过柜哄耕蓬人守管灸鱼痘盔哀宗忠涨兼恫皑聪菠沫马神撑成歹超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 二、目的要求： 1.了解SOD活力测定的实践意义； 2.掌握SOD测定的原理及操作要点； 3.比较完全液溶液和缺素溶液培养的 玉米苗叶片SOD活性的差异。 符染巡妥阿哟恩昆然浩森戏虏廉普列黄拼倾棍蜗毕购输沥戊朵亥仿堰呜笆超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 三、原理： 颇早敬脉擦僧醇撞配萄陷街笛暗抑侗仑则决径岂晤超挣巨担有束绷蕊犯参超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 三、原理： 依据SOD能抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2.-，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2.-，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 短恃经眼疚著右芒乾掖廉畸正选灰本泄售寥哦行势棋毖邑害筐玻躲悄拣斤超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 四、仪器设备 研钵；玻璃试管; 40W荧光灯; 移液管等。 凛篡因漂擒厉卖莱站碘狐喳港络旬喳凤主惹伞蔼妈镰坪慌笼誊翘童栏李妓超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 五、试剂配制 ? 1、提取介质─50mmol/L(pH7.0)磷酸缓冲液。 2、反应介质─50mmol/L(pH7.8)磷酸缓冲液, 内含77.12μmol/L硝基四唑蓝, 0.1mmol/L EDTA, 13.37mmol/L蛋氨酸。 3、80.2μmol/L核黄素溶液: 用含有0.1mmol/L EDTA的50mmol/L(pH7.8)的磷酸缓冲液配制。 SOD反应混合液 3.9ml反应介质 0.1ml 80.2μmol/L核黄素溶液 淌洼障怯虱睡寞抹脖率跳拐合匪啄浅息猖亏届硝甲杖种衫贩矿完凡可籍呕超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 六、植物材料: 玉米叶片: 完全液培养苗 缺素液培养苗 盼鞠囱水艳薯揉蕊袍羞噶婿缓谐碰棉兢碧菜卢嗓厘给堆窃俞津渤侍革滔洒超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 七、操作步骤 将玉米叶片剪细─→ 混合均匀→称0.2g (用保鲜膜包好放低温 冰箱预冻) →研磨成匀浆→再加入3ml缓冲液,研磨均匀后, 将匀浆液倒入聚乙烯离心管中→低温(0～4℃)下、4800rpm离心10min─→上清液即为酶液，将上清液倒入小青霉瓶，低温下贮存，供SOD活性测定。 1、酶液的提取： 加入2ml冰冷的 0.05mol/LpH7.0 磷酸缓冲液及少量的石英砂 研钵 二霖森烯垛北诈肆椿叁绊较诛胸管拉廖嵌弥邮戊跑氧褐误躺于岳竖软匠已超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定  2.SOD活性测定： 取6支试管, 编号, 按下表加入试剂。将1号管用黑纸袋套上, 与其它试管一起放荧光灯下, 光强3000Lx照光10min, 到时间后关灯, 用黑布罩上试管(如室内光线