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干法保藏菌种的方法 滴入小试管(在放入大试管干燥器中) 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法(L-干燥法) 冷冻真空干燥法 细粒状载体(土壤、沙粒、土壤+沙粒) 球块状载体(硅胶、瓷球) 合适的载体 有机基质(曲料、麦粒) 滤纸片 薄片状载体 明胶小片(滴在蜡纸板上干燥而成) 血清蛋白小片(…乙烯薄膜… ) 几种常用菌种保藏方法的比较 * 一、菌种的衰退与复壮的概念 1.衰退(degeneration) :菌种在培养或保藏过程中,由于自发突变的存在,出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象,称为菌种的衰退。 衰退的原因:①基因突变,②分离现象。 常见的衰退现象: 菌落和细胞形态的改变; 生长速度缓慢,产孢子越来越少; 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降; 第四节 菌种的衰退、复壮及保藏 2、 菌种的复壮(rejuvenation):使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下,通过纯种分离和生产性能测定等方法,从衰退的群体中找出未衰退的个体,以达到恢复该菌原有典型性状的措施;广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作,以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变(正变)不断地从生产中选种菌种的复壮措施:①纯种分离:(平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等)。 ②通过寄主体内生长进行复壮(如Bacillus thuringiensis的复壮) ; ③淘汰已衰退的个体(采用比较激烈的理化条件进行处理,以杀死生命力较差的已衰退个体)。④采用有效的菌种保藏方法。 3、防止菌种衰退的方法: ①控制传代次数(一般在DNA的复制过程中,碱基的错配率是5x10-4,自发突变的频率为10-8~10-9,采用良好的菌种保藏方法,可以减少移种和传代的数); ②选择合适的培养条件; ③采用不同类型的细胞进行传代(对丝状微生物而言,通常采用稳定的单核孢子进行接种); ④采用有效的菌种保藏方法。 二、菌种保藏:1. 目的:①存活,不丢失,不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种2. 原理:选用优良的纯种,(最好是休眠体,如分生孢子、芽胞等),创造降低微生物代谢活动强度,生长繁殖受抑制,难以发生突变的环境条件。(其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等) 菌 连续在培养基上(内)移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上(内)移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质(蒸馏水、糖液、其它溶液) 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 3.菌种保藏的方法 3、方法:①低温保藏法方法:菌种管置4℃冰箱保藏,定时传代 原理:低温下,微生物代谢强度明显下降 。②石蜡油低温保藏法:橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法,适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏,保藏时间几至几十年。 ④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物,便于大量保藏,菌种存活时间长,是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中,预冻后保存在液氮超低温冰箱中( -196℃)。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。 菌种保藏机构的任务:广泛收集科研和生产菌种、菌
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