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培养基的制备和高压蒸汽灭菌 目的与要求 1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。 2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。 3、初步掌握划线和涂布平板的技术。 4、了解抗生素对细菌的抑制作用。 培养基的配制过程 计算用量:200ml固体培养基 称量：托盘天平 溶解：自来水 调pH：自然pH 灭菌： 一般培养基， 121 0C, 15-30min：20min； 含糖培养基： 112 0C, 15-30min； 易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合 倒平板 灭菌 灭菌（Sterilization）是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。 倒平板 平板划线的基本程序 连续划线法 每组4人 需要灭菌的东西： 固体培养基200ml（2g蛋白胨，0.6g牛肉膏，1gNaCl，4g琼脂，自来水200ml，自然pH） 培养皿10个（每人倒平板两个，一个划线，一个涂布；涂布的那个用于抑菌圈实验） 1ml移液管4支(每人1支） 滤纸片，每人两片，每组需剪10片，装入培养皿中灭菌 思考题 1、总结一下，配制培养基应注意哪些问题。 2、高压灭菌的关键是什么？ 3、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果，为什么？ （1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。 （2）放入需要灭菌的东西。 注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。 （3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋） （4）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到121℃），控制热源维持所需时间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。 注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。 （5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。 注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。 * * 2007.11 配培养基 灭菌、倒平板 划线、涂布平板 抑菌圈实验 实验流程 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理 培养基 培养基（medium)：由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。 在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。 培养基 按化学成分来分类 按物理状态来分类 按功能进行分类 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 脱水培养基 基础（本）培养基 营养（加富）培养基 完全培养基 选择培养基 鉴别培养基 3g/L 牛肉膏 10g/L 蛋白胨 5g/L NaCl 2% 琼脂粉 灭菌方法 化学药品灭菌 辐射灭菌 过滤除菌 加热法 干热灭菌 湿热灭菌 火焰灼烧 热空气灭菌 煮沸消毒法 常压蒸汽灭菌法 高压蒸汽法 高压蒸汽灭菌锅的构造 高压蒸汽灭菌锅的使用 待灭菌物品的包扎 装锅、加水 加盖 （对角线均匀拧旋） 升温、排气（放大气5min） 恒温 切断电源、冷却 开锅取物 121℃ 20min 融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准) 灭菌接种环 沾取菌液 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 灭菌过的移液管 吸取菌液0.1ml滴在培养皿中央 用灭菌的涂布棒均匀涂布： 将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀， 然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。 三角铁扒 平板涂布的基本程序 涂布好的平板 滤纸片 抑菌圈实验 青霉素 具体操作步骤：