2-1免疫组织化学技术幻灯片.pptVIP

第四章、免疫组织化学技术 Immunohistochemistry 吉林大学白求恩医学院 组织胚胎学系 李树蕾 2013-11-19 概念：应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些多肽和蛋白质等大分子物质进行原位定性、定位或定量研究的技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。 基本过程：被检抗原/半抗原提取→免疫动物→特异性抗体→标记抗体→抗原抗体反应部位出现有色沉淀 免疫酶组织化学 免疫荧光组织化学 免疫胶体金组织化学 亲和免疫组织化学 （抗原信号放大系统） 优点：特异性强，敏感度高，应用广泛。 第一节 免疫组织化学基本原理 一、直接法 用酶或其它标记物标记的特异性抗体直接与标本中的相应抗原结合，再与酶的底物作用产生有色产物沉积，在抗原抗体反应的部位即可检测。 优点：简单快速，特异性强，非特异性反应低； 缺点：敏感性差；抗原量要求高；很难获得各种市售标记抗体。（肿瘤蛋白标记物：低丰度蛋白） 第一抗体（兔）不标记，使用与一抗种属相同抗体的Fc段（有种属特异性）作为抗原免疫动物（羊），制备抗抗体，即第二抗体（羊抗兔），并标记第二抗体。 优点：间接法因第二抗体的放大作用敏感性大大增高（放大原理=抗原：抗体1：6）； 缺点：可能出现非特异性反应； 三、亲和免疫组织化学 (一)亲和素-生物