氢化可的松致SD大鼠肾阳虚证卵巢早衰模型分析.docVIP

氢化可的松致SD大鼠肾阳虚证卵巢早衰模型分析 　　卵巢早衰 (premature　ovarian　failure，POF)是指女性40岁以前出现绝经或下丘脑性闭经，伴见围绝期症状群，具有高促性腺激素和低雌激素特征的妇科疑难病，是妇科内分泌领域的常见病，占妇女人群的1%～3%，卵巢早衰发病率有逐年上升和年轻化趋势[。中医妇产科中无卵巢早衰病名，但卵巢早衰症状与中医妇产科中不孕症、闭经、月经过少、血枯、未老经水断、绝经前后诸症等临床表现特点类似，中医肾阳虚证是上述中医病、症临床常见的病理状态之一，因此肾阳虚证也是卵巢早衰常见的证型之一。卵巢早衰动物模型国内外报道有很多种，比较常见的有化疗药物如环磷酰胺、紫杉醇、顺铂等致卵巢早衰模型，中药雷公藤也可致卵巢早衰，基因敲除卵巢可致早衰模型，其他方法如放射线、半乳糖血症、应激模型、超促排卵模型、高血压、自然衰老和药物去势等可致卵巢早衰模型。 　　国内肾阳虚证造模方法很多，主要分为3大类：药物干预，手术切除和模拟中医病因病机。陈英华等研究指出，肾阳虚模型应从一般状态观察及试验检测、客观指标、药物反证，3个大的方面进行诊断;旺建伟等研究认为，中医证模型具有中医理论特色，可以分为中医一般状态评价和借助现代医学方法学进行评价。在肾阳虚证药物造模中，氢化可的松是最早使用且公认的造模药物。肾阳虚模型的建立是探讨中医证候实质和中药药性实质的基础，也是现代中医药研究的重点，研究西医的病与中医证相结合的动物模型，是中西医结合研究的一种方法探讨。目前肾阳虚证卵巢早衰的动物模型报道并不多见，本研究试图建立氢化可的松致SD雌性大鼠肾阳虚证卵巢早衰模型，观察大鼠的大体情况、动情周期、卵巢指数、子宫指数和血清生殖激素等，为临床治疗肾阳虚证卵巢早衰探索实验基础。 　　1　材料与方法 　　1.1　材料 　　实验动物： SPF级SD雌性大鼠32只，购入体质量200～240g，年龄8～9周龄，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号SYXK(粤)2013-0002。主要实验仪器及试剂：氢化可的松注射液，批号1411403-A12，规格20mL，100mg，性状：无色澄明液体，生产单位：国药集团容生制药有限公司，购自广州中山医药有限公司;S-3000A电子天平：上海友声衡器有限公司，感量0.1g;BS224S电子天平：北京赛多利斯仪器有限公司，感量0.000　1g。自动放免仪：中国科大中佳公司，E2试剂盒，批FSH、LH 试剂盒，批均购自北京北方生物技术研究所。 　　1.2　实验方法 　　1.2.1　检疫　对购入SD大鼠检疫3d。期间每日检查大鼠1次，如发现不健康大鼠立即剔除，选用健康大鼠进行实验。 　　1.2.2　饲养　动物饲养在广东省医学实验动物中心SPF级动物房，识别方法：采用被毛染色法，使用饱和苦味酸对大鼠进行编号，在大鼠体表不同部位的被毛涂染斑点，以示不同号码。以大鼠皮肤染色和笼具双重编号标记识别。动物饲养条件：5～6只/箱，群养。饲养温度与相对湿度：20～26℃，40%～70%，采用10h∶14h昼夜间断照明;饲养室条件始终保持稳定，以保证实验结果的可靠性。自由进食饮水，饲料和饮用水均由广东省医学实验动物中心提供。 　　1.2.3　分组　对购入SPF级成年性成熟雌性SD大鼠32只(未孕未产)，适应性饲养3d后，将纳入实验的大鼠随机分为对照组16只、模型组16只。 　　1.2.4　肾阳虚证POF造模　模型组大鼠每日上午后下肢肌注氢化可的松32mg·kg-1·d-1，1次/d，连续12d。 　　1.2.5　一般临床情况观察　观察记录大鼠体形、被毛、皮肤、粪便、肌肉张力、步态、精神、呼吸和进食等情况，同时观察是否出现外生殖器潮湿、阴道口变大、触之兴奋等动情期反应，1次/d。 　　1.2.6　体质量　造模期及给药期，每5d称量大鼠体质量1次，每周测量大鼠摄食量1次。 　　1.2.7　动情周期检查　从氢化可的松注射造模第一天起，每天上午抓取大鼠进行连续阴道涂片，性周期消失或动情间期持续或延长可确定造模成功。涂片在光镜下观察，根据阴道细胞形态判断大鼠动情周期。动情前期：光镜下以椭圆形有核上皮细胞占多数，白细胞和角质化上皮细胞很少;动情期：以片状角化上皮细胞为主，白细胞和有核上皮细胞很少，动情后期片状角质化上皮细胞、有核上皮细胞和白细胞均有，比例无明显异常;动情间期：白细胞占绝大多数，有核上皮和角质化上皮细胞很少。 　　1.2.8　相关激素检测　于末次肌肉注射后第24h(第一阶段)和第14天(第二阶段)，对照组和模型组各随机抽取8只大鼠进行取材检测。腹主动脉采血，