二轮复习单克隆抗体的过程.pptVIP

单克隆抗体 温故知新： 1.细胞工程的两大类型？各自的技术手段及其原理是？ 植物细胞工程： 植物组织培养（细胞的全能性） 植物体细胞杂交 （细胞的全能性、细胞膜的流动性） 动物细胞工程： 动物细胞培养（细胞增殖） 核移植（动物细胞核的全能性） 动物细胞融合（细胞膜的流动性） 单克隆抗体 （细胞膜的流动性、细胞增殖） 传统的抗体生产方法及缺陷 单克隆抗体 单克隆抗体 高考热点： 1.此过程中的B淋巴细胞是经过免疫的，实际上就是浆细胞。 2.融合后形成的杂交细胞有多种，考虑两两融合，共有三种： B-B、B-瘤(杂交瘤细胞) 、瘤-瘤 3.单克隆抗体制备中用到的技术手段： 动物细胞融合、动物细胞培养。 4.原理：细胞膜的流动性、细胞增殖 * 2.核移植的两大类型？其中提供细胞质的为去核的卵母细胞，为什么选去核的卵母细胞？ 3.动物细胞融合的实质，原理和方法？ 融合后的细胞叫？ 体积大，易操作； 含有使细胞核的全能性容易表达的物质和营养条件 1.传统的生产方法: 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。 2.缺陷：产量低、纯度低，而且制备的抗体特异性差。 主要分布血清， 还有的分布在组织液，外分泌液 1.概念： 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所 产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。 2.特点： 　　　特异性强、灵敏度高 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合 单克隆抗体 既能在体外大量繁殖，又能产生特异性抗体 浆细胞 第一次筛选用特定的选择培养基帅选出杂交瘤细胞 融合 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 在培养基中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！ 3种杂交细胞：①B-B融合细胞、②杂交瘤细胞 ③瘤-瘤融合细胞 未融合的细胞：④单个的B细胞、⑤单个的骨髓瘤细胞 这五种细胞中， ① ④没有分裂能力，逐渐衰老死亡； ③ ⑤的DNA复制只有D途径， 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，也逐渐衰老死亡， 但②的DNA复制有D、S两条途径，虽然D途径被氨基嘌呤阻断，但是还可以通过 S 途径进行DNA的复制，使细胞有分裂能力。 通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。 ②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性孔 方法——抗原-抗体杂交法 用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。 抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应 如何得到大量的单克隆抗体？ 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。 单克隆抗体 第二次筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 培养 第一次筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能大量繁殖又能产生专一抗体 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 特定的选择培养基 多孔细胞培养板 5.整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选用特定的选择培养基， 筛选出杂交瘤细胞（多种） 第二次用多孔培养板， 筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 * * *