重组DNA技术.ppt.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 左下角处有超级链接到配伍末端 * * * * * * * * * 载体加接头 Artificial linker （人工接头） 第五节 重组DNA导入受体细胞 受体菌的条件 安全宿主菌 遗传背景清楚！ HB101；JM109；DH5a 处于感受态(Competent cells) 即容易接受外源DNA的状态。 特殊处理 受体细胞 转化(Transformation): 是将外源DNA分子引入受体细胞, 使之获得新的遗传性状的一种手段。 电击法 CaCl2 转化的主要方法 导入方式 转化 (transformation)：质粒为载体 转染 (transfection)：噬菌体和病毒为载体 其原理是： 细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形; 转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面; 经42℃短时间热击处理，可促进细胞吸收DNA复合物。 受体细菌 50-100mmol/L CaCl2 感受态细菌 重组体转入细菌 CaCl2处理 基因重组 转染 体外包装 噬菌体 噬菌体体外包装 第六节 重组DNA分子的鉴定 基因克隆的最后一步是从转化细菌菌落中筛选出含有阳性重组