人血管紧张素Ⅱ受体2(AT2R)酶联免疫分析.docVIP

人血管紧张素Ⅱ受体2 (AT2R)酶联免疫分析盒使用说明书E0973h 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中AT2R含量。 实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相体，往包被的微孔中依次加入、，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成 酶联板：一块标准：瓶，稀释液稀释稀释液稀释液ml/瓶稀释液1×10ml/瓶稀释液1×10ml/瓶l/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液l/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。 底物溶液：1×10ml/瓶。 浓洗涤液1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液1×10ml/瓶（N H2SO4）。 的采集及保存 1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过3个月，-80℃不应超过6个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；高血脂的标本不需进行特殊处理，可直接检测。 操作步骤 试剂或样品稀释时，混匀。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。待测样品孔ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀，37℃反应120分钟甩干每孔加100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液37℃,60分钟。 温育60分钟后，甩干洗板3次350ul/每孔，甩干。 每孔加100ul，37，0分钟，甩干洗板5次，350ul/每孔，甩干。依序每孔加ul，37℃避光显色分钟依序每孔加溶液50ul，终止反应。用酶联仪在4nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）： 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加溶液及N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.ml注入孔内，浸泡1-2分钟根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。 乘以 - 1000 pg/ml 最低检测限：7.8 pg/ml 说明 只有全部使用试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。洗涤不充分将影响试验结果-20℃（较长时间不用时）；2-8（频繁使用时）。浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 酶联板