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人胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫检测
人胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫检测
试剂盒使用说明书
使用前阅读。酶联免疫试剂盒是基于夹心只能用于研究用途不得用于医学诊断。用途: 用于
工作原理是夹心酶联免疫吸附法ELISA)测定预先包被克隆抗体,并在酸的作用下转化成最终的黄色。呈正相关
1 标准pmol/L) 0.5ml 7 显色剂A液 6ml 2 标准品稀释液酶板-HRP 6ml 10 说明书 1份 5 30倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2张 6 生物素标记的抗- GLP-1抗体 1ml 12 密封袋 1个 需要而未提供的试剂和器材
℃恒温箱。
标准规格酶标仪。
一次性试管注意事项
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和。洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将洗涤液至少ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中-20℃保存,但应避免反复冻融操作程序pmol/L (5号标准品) 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 32pmol/L (4号标准品) 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 16pmol/L (3号标准品) 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 8pmol/L (2号标准品) 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 4pmol/L (1号标准品) 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
加样:1)空白孔:空白对照孔不加样品,生物素标记的抗GLP-1抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂AB和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50μl,链霉素-HRP50μl(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)待测样品孔:加入样本40μl,然后各加入抗- GLP-1抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl,盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育60分钟。
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
终止:每孔加终止液50μl,终止反应。450nm波长依序测量各孔的度(OD值)根据样品的值在上对应的浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
准备试剂,样品和标准品
加入准备好的样品和标准品,生物素标记二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟
洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟
加入终止液
15分钟之内读OD值
计算
检测范围:pmol/L→100pmol/L。保存:
有效期: 个月()。
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