理想树600分考点700分考法高考生物专题复习课件：专题18基因工程（共25张PPT）.pptxVIP

专题18基因工程考点55 基因工程的工具及操作程序考点56 基因工程的应用及蛋白质工程理想树出品考点55基因工程的工具及操作程序考点55基因工程的工具及操作程序应试基础必备高考考法突破考法1基因工程的概念与操作工具分析考法2基因工程的基本操作程序考点55基因工程的工具及操作程序应试基础必备1．基因工程的概念理解(1)操作环境：体外——关键步骤“表达载体的构建”的环境。(2)优点：与杂交育种相比，能克服远缘杂交不亲和障碍；与诱变育种相比，能定向改造生物性状。(3)操作水平：分子水平。(4)原理：基因重组。(5)本质：甲(供体提供目的基因)导入乙(受体表达目的基因)，即基因未变、合成蛋白质未变，只是合成场所的转移。2．基因工程的基本工具(1)限制性核酸内切酶——“分子手术刀”①来源及化学本质：主要是从原核生物中分离纯化出来的蛋白质。②作用：催化作用，可重复利用；可用于DNA的切割(获取目的基因)和载体的切割。③作用特点：特异性，即限制酶可识别特定的脱氧核苷酸序列，切割特定位点。④切割方式：包括错位切和平切，错位切产生两个相同的黏性末端；平切形成平末端。考点55基因工程的工具及操作程序(2)DNA连接酶——“分子缝合针”①功能：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸间的磷酸二酯键。②种类：E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。(3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”①作用：携带外源基因进入受体细胞，并在受体细胞内对目的基因进行大量复制。②必须具备的条件：a．能在受体细胞中稳定保存并复制。载体可在细胞中自我复制或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。b．具有一个至多个限制酶的切割位点，以便与外源基因连接。c．具有特殊的标记基因，供重组DNA的检测与鉴定。③种类：最常用的载体是质粒，其他载体有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。3．基因工程的基本操作程序(1)目的基因的获取获取目的基因的途径主要有以下三种：①从自然界中已有的物种中分离出来，如从基因组文库或cDNA文库中获取。②通过PCR技术扩增获取a．原理：DNA复制。b．前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。c．其他条件：一对引物、四种游离的脱氧核苷酸、热稳定的DNA聚合酶、能量等。应试基础必备考点55基因工程的工具及操作程序③人工合成：常用的方法有化学合成法和反转录法。(2)基因表达载体的构建①构建基因表达载体是基因工程中最核心、最关键的一步，在体外进行。其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。②基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等，如图所示。a．启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA。b．终止子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。c．标记基因：筛选、鉴别受体细胞是否含有目的基因。应试基础必备考点55基因工程的工具及操作程序③基因表达载体的构建方法(3)将目的基因导入受体细胞①转化的概念：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。应试基础必备考点55基因工程的工具及操作程序②常用的转化方法和过程细胞类型常用方法受体细胞转化过程植物细胞农杆菌转化法体细胞将目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→转入农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA上动物细胞显微注射法受精卵将含有目的基因的表达载体提纯→取卵→获得受精卵→显微注射→早期胚胎培养→胚胎移植→发育成为具有新性状的动物微生物细胞Ca2＋处理增大细胞壁通透性原核细胞或酵母菌用Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收③转化的实质：目的基因整合到受体细胞基因组中，从而使受体生物获得新的遗传特性。(4)目的基因的检测和表达返回考点目录应试基础必备考点55基因工程的工具及操作程序高考考法突破考法1　基因工程的概念与操作工具分析角度1　基因工程的概念分析基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切→拼接→导入→表达结果人类需要的基因产物角度2　几组概念的辨析1．E·coli DNA连接酶与T4DNA连接酶的比较常用类型E·coli DNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体功能只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来连接黏性末端或平末端，但连接平末端的效率低相同点恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键考点55基因工程的工具及操作程序2．DNA连接酶与DNA聚合酶的比较DNA连接酶DNA聚合酶作用实质都是催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键是否需模板不需要需要连接DNA链双链单链