微生物实验技术分析.pptx

《食品微生物学实验》开放性实验项目报告书 “校园湖水中细菌学检查” 一、实验流程图 参考文献：1. 中华人民共和国国家标准.食品卫生微生物学检验，GB/T4789.32003:1318 2. 论大肠菌群检测方法（华中农业大学学士学位论文） 3. 《水环境中大肠菌群的检测方法的研究》 4. 中国环境检测《水中大肠菌群的快速检测方法》 5. 环境保护与循环经济《水环境中大肠菌群的检测方法的研究》 6. 环境工程微生物学第二版，周群英、高延耀篇著 高等教育出版社出版 7.环境工程微生物学, 王国惠 主编 化学工业出版社出版 2005.7 8．污染控制微生物试验，马放、任南琪、杨基先 主编 哈尔滨工业大学出版社出版 2006.1 9.环境微生物学，乐毅全、王士男 化学工业出版社 2005.3 10．水质的细菌学检验 撖云轩 二、实验目的 1. 学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法； 2. 掌握水样中大肠菌群测定的原理、意义和检测方法。 三、实验原理 1.细菌总数检测原理：水中的细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高，水体被污染的程度越重。水中细菌的种属繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。 2.大肠菌群检测的原理：大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 MPN法是一种将样品多次管稀释至无菌的计数方法，将三个稀释梯度的待检验样品稀释液接种于九只或15只试管培养基中，每个稀释梯度样液接种3或5支，经过培养后查阅MPN检测表，就可以得到原来样品液中微生物的估计数量。 3.水和饮料的微生物指标评价标准：按中华人民共和国国家标准GB17324—1998.纯净水的微生物卫生指标为菌落总数≤20cfu/1ml。大肠菌群≤3mpn/100ml。致病菌不得检出。霉菌.酵母菌不得检出。其中一项不合格者为不合格产品。 四、实验步骤 （一）材料的采集：校园湖水——星月湖 取距湖水面10-15cm深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱4°C中保存，但不能超过24h。 （二）材料的预处理： 1．乳糖蛋白胨培养基(供多管发酵法的复发酵用) (1) 成份：蛋白胨2.5g，牛肉膏0.75g，乳糖1.25g，Nacl 1.25g，1.6%溴甲酚紫乙醇0.25ml，蒸馏水250ml. (2) PH=7.2-7.4 (3) 制备：按配方分别称取上述成份加热溶于250ml蒸馏水，调整pH=7.2-7.4加入1.6%的溴甲酚乙醇溶液0.25ml。充分混匀后分装于试管内，每管10ml，另取一小倒管装满培养基倒放入试管内，塞好棉塞，包扎。置于高压灭菌锅内以0.7kg/cm2（115℃）灭菌20min,取出置于阴冷处备用。 2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（供多管法发酵用） （1）成份：蛋白胨7.5g,牛肉膏2.25g,乳糖3.75g,Nacl3.75g,1.6%溴甲酚紫乙醇 溶液0.75ml,蒸馏水250ml。 （2）pH=7.2-7.4 (3)制备：按配方分别称取上述成份加热溶于250ml蒸馏水，调整pH=7.2-7.4加入1.6%的溴甲酚乙醇溶液0.75ml，充分混匀后分装于试管内，每管5ml。在每管中倒放入装满培养基的小导管。塞好棉塞，包扎，置于高压灭菌锅内以115℃灭菌20min，取出置于阴冷处备用。 3．伊红美蓝培养基 （1）成份：蛋白胨2.5g，乳糖2.5g,磷酸氢二钾0.5g,琼脂5g, 蒸馏水250ml., 2%伊红5ml,美蓝水溶液3.25ml。 （2）制备：先将琼脂加至200ml蒸馏水，加热溶解，后加入磷酸氢二钾及蛋白胨乳糖使之溶解,再调pH=7.2-7.4,再加入伊红,美蓝水溶液, 置于高压灭菌锅内以（115℃）灭菌20min,储存于冷暗处备用。 4．牛肉膏蛋白胨培养基制备 (1) 蛋白胨1.5g，牛肉膏0.75g