细说麸炒苍术不同部位对大鼠脾虚的影响.docVIP

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  • 2017-02-21 发布于河北
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细说麸炒苍术不同部位对大鼠脾虚的影响.doc

细说麸炒苍术不同部位对大鼠脾虚的影响

细说麸炒苍术不同部位对大鼠脾虚的影响   苍 术 为 菊 科 植 物 苍 术 Atractylodes lancea(Thunb.) DC.或北苍术A. chinensis (DC.) Koidz.的干燥根茎,味辛、苦,性温,归脾、胃、肝经,具有燥湿健脾、祛风散寒、明目等功效。苍术富含挥发油,主要成分包括倍半萜类、聚乙烯炔类、糖苷类以及多糖类等。本课题组前期对苍术中多种化学成分进行了炮制前后变化规律的研究,明确了苍术麸炒后多个成分的变化规律。药效学实验表明生苍术和麸炒苍术均有健脾作用,但麸炒苍术的药效明显优于生苍术。本实验采用番泻叶水煎液制备大鼠脾虚模型,考察麸炒苍术各部位的健脾活性,以期为后续比较生苍术和麸炒苍术健脾活性部位药效和化学成分,进而深入解析苍术的麸炒机制。   1 材料   1.1 动物   SPF 级别SD 大鼠200 只,雌雄各半,体质量(200plusmn;20)g,由辽宁长生生物技术有限公司提供,动物生产许可证SCXK(辽)2010-0001。   1.2 药物   苍术购自北京同仁堂大药房大连分店,经辽宁中医药大学鉴定教研室李峰教授鉴定为苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的干燥根茎,苍术麸炒方法参考《中国药典》2010 年版附录ⅡD 麸炒法。番泻叶由安徽省本草国药饮片有限公司提供,产地为云南省,批号140802。胃泌素酶联免疫分析试剂盒(批号201410)、大鼠活性肠肽酶联免疫分析试剂盒(批号201410)均购自上海科兴商贸有限公司,D-木糖试剂盒(批、血清淀粉酶试剂盒(批均购自南京建成生物工程研究所。   1.3 仪器   UV1800 紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);高速低温离心机(德国Biofuge 公司);Model 550 Microplate Reader 酶标仪(Biorad 公司);RE-52C 旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司)。   2 方法   2.1 药液的制备   取麸炒苍术粉末适量(过 50 目筛),加水8 倍量浸泡1 h,水蒸气蒸馏法提取挥发油,至挥发油量不再增加视为提取完全。结果表明麸炒苍术挥发油的收率为4.25%。提取挥发油后的水提液滤过,滤液减压浓缩,作为水提液,备用。取上述水提液适量,依次以二氯甲烷、正丁醇等体积萃取3 次,萃取液减压浓缩呈稠膏,分别作为二氯甲烷萃取物、正丁醇萃取物,收率分别为0.123%、2.107%,备用。再将经萃取后的剩余水液以95%乙醇调节乙醇体积分数至80%,进行醇沉,冷藏静置12 h,抽滤,风干至没有醇味,沉淀低温干燥,得粗多糖,备用。前期实验已证明麸炒苍术确有健脾作用,故本实验采用麸炒苍术水煎液作为对照药。取麸炒苍术粉末适量(过50 目筛),加水8 倍量浸泡1 h,煎煮30 min,滤过;药渣再加水3 倍量煮沸20 min,滤过,合并滤液,减压浓缩,作为水煎液,备用。由于各萃取物部位出膏率不同,为保证动物ig 的各个部位折合成相同的生药量,需要配制成含生药量相同但质量浓度不同的溶液。临用前将不同萃取物和水煎液制成含生药0.747、0.249、0.083 g/mL 水溶液;挥发油、二氯甲烷萃取物由于极性过小,需要加入少量聚山梨酯80 助溶,4 ℃冰箱中冷藏,备用。   2.2 分组   通过 Excel 软件产生的随机数将200 只大鼠随机分为20 组,每组10 只,分别为对照组,模型组,挥发油0.83、2.49、7.47 g/kg 组(2%聚山梨酯80),2%聚山梨酯80 组,二氯甲烷萃取物0.83、2.49、7.47 g/kg 组(0.1%聚山梨酯80),0.1%聚山梨酯80组,正丁醇萃取物0.83、2.49、7.47 g/kg 组,多糖0.83、2.49、7.47 g/kg 组,蒸馏水组,水煎液0.83、2.49、7.47 g/kg 组。   2.3 造模   结合金元时期著名医家李东垣在《脾胃论》中提出:“苦寒之药内伤脾胃”,且据文献记载苦寒药是以番泻叶作为脾虚模型的首选药。因此选取番泻叶水煎液进行大鼠脾虚造模。除对照组外,其余各组均按10 mL/kg ig 给予0.4 g/mL 番泻叶水煎液,2 次/d,连续7 d。7 d 后将给药量提高至原质量浓度1.5 倍,每只0.6 g/mL,10 mL/kg,2 次/d,连续给药7 d,共需造模14 d。对照组大鼠同法ig 给予等量蒸馏水。对照组大鼠选用正常垫料,其余造模组大鼠选用自制潮湿垫料。   2.4 给药   造模结束后,各给药组大鼠分别按10 mL/kg

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