谈唐草片对注射氢化可的松小鼠的免疫保护作用.docVIP

谈唐草片对注射氢化可的松小鼠的免疫保护作用 　　唐草片(Tangcaopian)是我国目前唯一获得国家食品药品监督管理局颁发新药证书、并获准上市的治疗艾滋病的纯中药制剂。唐草片是由老鹳草、金银花、瓜蒌皮等20余味精选中药材制成的中药制剂。唐草片临床治疗艾滋病的结果显示其可以提高患者CD4+T细胞数量，有效改善艾滋病患者的腹泻、失眠等临床症状，提高患者生活质量，增强其抗病毒能力，在延缓病情进展的同时能够减少化学药物的毒副作用。本实验通过观察唐草片对小鼠免疫系统的作用，探讨唐草片的作用机制，为临床应用提供实验依据。 　　1　材料与方法 　　1.1　药物及试剂 　　唐草片(上海百岁行药业有限公司，批号100901);氢化可的松(金耀氨基酸有限公司，批号;IFN-gamma; ELISA　Kit、IL-2ELISA　Kit(美国RD公司);CD4抗体、CD8抗体、IgG抗体(美国SANTA　CRUZ公司)。 　　1.2　动物 　　SPF级BALB/C 雄性小鼠，6周龄，体质量(20plusmn;2)g，购自河南省实验动物中心，合格证号：SCXX(豫)2010-0002。自由摄食和饮水。 　　1.3　分组与给药 　　60只小白鼠随机分成6组，每组10只，分别为正常对照组、氢化可的松模型组、香菇菌多糖阳性对照组、唐草片低剂量组(0.5　g·kg-1)、唐草片中剂量组(1.0g·kg-1)、唐草片高剂量组(2.0g·kg-1)。其中唐草片中剂量为临床用药的等效剂量，“唐草片”按照临床用药量9.6　g/人/天，按照小白鼠与人的等效计量进行换算，即人(70kg)与小白鼠(20　g)体表面积(0.0026)。所有小鼠按照每天0.1　mL/10　g的剂量灌胃3周，唐草片低(0.5　g·kg-1)、中(1.0g·kg-1)、高(2.0g·kg-1)3个剂量组灌服相应浓度的唐草片，阳性对照组灌服香菇菌多糖片(0.4　mg·kg-1)，正常对照组、模型对照组都灌服纯净水。2周后除正常组外每组动物均腹腔注射氢化可的松(25　mg·kg-1体质量)，连续1周，正常对照组腹腔注射生理盐水。 　　1.4　测定指标 　　末次给药6　h后，每只小鼠眼眶取血适当稀释后利用全自动全血检测仪检测外周血细胞数。小鼠碳廓清功能指标、脏器指数的测定参照文献[3]，按照下述公式计算吞噬指数(K)：K =(lgA1-lgA2)/(t2-t1)，其中A1、A2分别代表两次所采血样的吸光度，t2-t1代表两次采血的时间间隔(8　min)。脏器指数(mg·g-1)=脏器质量/小鼠体质量。血清中IL-2、IFN-gamma;含量的测定按照试剂盒使用说明书进行。肠道黏膜中IgA、CD4+ 和CD8+T细胞表达量的测定先进行免疫组织化学染色，然后采用德国Lecia显微照像系统，进行图像采集;利用Image-Proplus　6.0图像分析系统，测定其平均光密度。 　　1.5　数据分析 　　结果采用SPSS10.0统计软件进行数据分析，所有数据均用珚xplusmn;s表示，采用单因素方差分析(one-way　ANOVA)进行多组间均值比较。Plt;0.05为有统计学差异。 　　2　结果 　　2.1　唐草片对免疫抑制小鼠外周血细胞的影响 　　氢化可的松模型组小鼠白细胞和淋巴细胞的数量与正常组相比，明显减少(Plt;0.01);唐草片中、高剂量组与模型组相比，WBC和LYM 计数均明显升高(Plt;0.05)，其中唐草片中剂量升高最多(P lt;0.01)，结果见表1。说明唐草片能够升高免疫抑制__小鼠外周血中白细胞和淋巴细胞的数量。 　　2.2　唐草片对免疫抑制小鼠免疫器官和碳粒廓清指数的影响 　　氢化可的松模型组小鼠脾脏指数和胸腺指数与正常组相比，明显降低(Plt;0.01);唐草片中、高剂量组脏器指数均明显升高(Plt;0.05)，其中唐草片中剂量升高明显(Plt;0.01)。与模型组吞噬指数相比，只有唐草片中剂量组有显著升高作用(Plt;0.05)，提示唐草片能够促进免疫器官功能的恢复。 　　2.3　唐草片对免疫抑制小鼠血清中Th1型细胞因子含量的影响 　　氢化可的松模型组小鼠IL-2和IFN-gamma;的水平与正常组比较，明显降低(Plt;0.01);唐草片中剂量组与模型组相比明显升高(P lt;0.05)，说明唐草片能够增加免疫抑制小鼠血液中Th1型细胞因子的分泌。 　　2.4　唐草片对免疫抑制小鼠空肠中IgA、CD4+ 及CD8+T细胞表达量的影响 　　免疫组化实验结果显示，氢化可的松能够降低小鼠肠道IgA、CD4+ 及CD8+T细胞的表达(Plt;0.05)，而唐草片中、高剂量组I