谈地黄丸类方对肾阳虚大鼠HPA 轴的影响.docVIP

谈地黄丸类方对肾阳虚大鼠HPA 轴的影响 　　地黄丸类方是指以地黄、山药、山茱萸、茯苓、泽泻、牡丹皮等为基础方衍生的一系列用于治疗肾虚的复方，最早出现在汉代张仲景的《金匮要略》中，又名肾气丸，用于治疗肾气不足，气化不及，小便不利的症状，现代多用于治疗肾阳虚证。地黄丸类复方种类较多，应用也较为广泛，尤其以桂附地黄丸、六味地黄丸、知柏地黄丸等应用最多。中医治病的原则是辨证施治，现代疾病虽然复杂，但仍存在明显的证候差异，两类不同复方异病同治的物质基础以及内涵有待进一步研究。目前，肾虚本质的研究主要集中在神经内分泌系统、免疫系统、自由基、衰老等方面。本研究采用经典肾阳虚建模方法氢化可的松注射液肌注2 周造成大鼠肾阳虚模型，观察地黄丸类方对肾阳虚大鼠的生存状态、血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)及血清皮质酮(CORT)含量以及cAMP/cGMP 水平的影响，比较3 种地黄丸类方对肾阳虚大鼠生存状态及下丘脑- 垂体- 肾上腺轴(HPA)的影响，为临床合理用药提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品及试剂 　　六味地黄丸、知柏地黄丸、桂附地黄丸，均为河南省宛西制药股份有限公司产品，批号分别为：120309，120301 和120402;氢化可的松注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批号：1110211;无菌生理盐水，贵州科伦药业有限公司，批号大鼠血浆cAMP 试剂盒， 批号：DRE68730; 大鼠血浆cGMP 试剂盒， 批号：DRE68735; 大鼠血浆CRH 试剂盒， 批号：DRE69547; 大鼠血浆ACTH 试剂盒， 批号：DRE69548; 大鼠血清CORT 试剂盒， 批号：DRE68355，均为广州有田生物科技有限公司产品。 　　1.2 仪器 　　LF26-MESJ 分析天平，香港佳立国际有限公司;TC-3K 电子天平，深圳市华恒科技有限公司;欧姆龙体温计MC-246，欧姆龙(大连)有限公司;RT-2100C 酶标仪，深圳雷杜公司。 　　1.3 动物 　　SD 大鼠，SPF 级，雄性，体质量180～220 g，广州中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(粤)2008-0020。 　　1.4 分组、模型 　　复制及给药取SD 大鼠80 只，随机分为正常组10 只，氢化可的松组70 只。正常组肌肉注射等体积生理盐水，其余大鼠每天于后肢外侧肌肉注射氢化可的松注射液25 mg·kg-1，左右后肢交替注射，连续注射14 d。造模结束后，将氢化可的松组的70 只大鼠随机分成7 组(每组10 只)，即模型组，六味地黄丸高、低剂量组(4，1 g·kg-1)，知柏地黄丸高、低剂量组(4，1 g·kg-1)，桂附地黄丸高、低剂量组(4，1 g·kg-1)。灌胃给药，各药物组灌胃相应药物，正常组、模型组给予等体积灭菌蒸馏水，连续21 d。 　　1.5 一般状态 　　观察实验期间考察各组大鼠精神状态、体质量、肛温的变化。1.6 血浆cAMP、cGMP、CRH、ACTH 及血清CORT 水平的检测末次给药后1 h，腹腔内注射10 %水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉采血，分装于无肝素钠离心管和有肝素钠离心管中，静止1~2 h，分离血清、血浆，按照试剂盒说明书检测大鼠血浆cAMP、cGMP、CRH、ACTH 及血清CORT 含量;计算cAMP/cGMP。 　　1.7 统计学处理 　　方法采用SPSS17.0 统计软件进行分析，各组数据均以均数plusmn;标准差(xplusmn;s)表示，多组间的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，组间两两比较用LSD 法。 　　2 结果 　　2.1 对肾阳虚型大鼠生存状态的影响与正常组比较，模型组大鼠少动怕冷、大便溏泻、毛发无光泽、消瘦萎靡，3 周后状态基本无改变。与模型组比较，桂附地黄丸组给药2 周后多数大鼠便溏现象好转，行为活跃，精神状态较佳，3 周后基本无便溏现象，动作活跃，毛发有光泽;六味地黄丸组大鼠在给药3 周后便溏现象有所好转，但仍有部分大鼠便溏，大鼠状态趋向良好，动作行为活跃;知柏地黄丸组大鼠给药3 周后除体重略有升高外，其余状态变化较小。给药前除正常组外，其余大鼠采用随机分组，故各组大鼠体质量相似，差异无统计学意义(P gt; 0.05);与模型组比较，给药2 周，3 种地黄丸方高、低剂量组均能较快的增加大鼠体质量(P lt;0.05，P lt; 0.01);给药3 周后，大鼠体质量虽有增长(P lt; 0.05，P lt; 0.01)，但增长速率明显降低，最终均未达到正常水平;提示3 种地黄丸方均有纠正大鼠阳虚体质