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谈基于“内外结合”分析马钱子的炮制火候 　　马钱子有大毒，具有通络止痛、散结消肿之功效，用于治疗风湿顽痹、麻木瘫痪、跌扑损伤、痈疽肿痛、小儿麻痹后遗症、类风湿性关节痛等，临床须经炮制减毒后方可使用。中药炮制讲究火候，毒剧类中药，若炮制太过，有效成分损失较多，难以保证临床药效; 若炮制不及，则毒性成分破坏较少，难以保证用药安全。因此，掌控马钱子炮制火候对保证其药效和用药安全十分重要。 　　传统的马钱子炮制火候评价主要依据老药工的经验，通过眼看、鼻闻、口尝等方式获取中药性状信息来判断炮制程度，如棕褐色或棕深色、微有香气等。但传统经验评价方式存在较大的主观性及操作性不强、重复性差等问题，且随着老药工的减少，其经验传承变得越来越难。另外，还可通过分析马钱子饮片的内在成分来体现马钱子炮制火候，如采用HPLC 测定马钱子中士的宁和马钱子碱等的含量，但不能全面反映饮片质量，需要结合性状等其他指标来综合分析。 　　本实验以性状及指标成分含量均可反映马钱子炮制火候的特点为依据，通过客观化性状并结合含量测定方法对马钱子炮制火候进行评价。采用机器视觉及电子鼻技术实现对马钱子及其不同炮制火候饮片的颜色和气味的客观量化，结合化学计量学方法对不同样品进行鉴别区分。通过HPLC 测定不同样品中马钱子碱、士的宁的含量，结合颜色、气味值变化规律，建立内在成分与外在颜色、气味相结合的马钱子炮制火候综合评价法。 　　1 材料 　　机器视觉系统( 自制，含新药工中药颜色识别系统V1. 0)，EOS 60D 型数码相机( 日本Canon 公司) ，HAD QT-310 型摄影箱( 上海胜林珠宝首饰有限公司) ，CYDH-600T 型可控温滚筒式炒药机( 杭州春江自动化研究所) ，LC-2010A 型高效液相色谱仪( 日本岛津公司) ，FOX 4000 型电子鼻( 法国AlphaMos 公司) ，BP211D 型电子天平( 德国赛多利斯公司) 。马钱子碱、士的宁对照品( 中国食品药品检定研究院，纯度分别为95. 9%，97. 0%，批号依次为110706-200505， 110705-200306) ，水为去离子水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。马钱子药材购自四川省中药饮片有限公司，并委托其进行炮制，经成都中医药大学马逾英教授鉴定为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica 的干燥成熟种子; 该药材不同火候的炮制品经成都中医药大学吴纯洁教授鉴定合格。 　　2 方法与结果 　　2. 1 马钱子的炮制 　　取河砂过筛得300 ～600 mu;m的颗粒，洗净，备用。按砂药比7∶ 1在炒药机加入河砂，待温度升至210 ℃ 时加入马钱子药材( 灰棕色或灰绿色) ，炒制温度200 ～ 220 ℃，炒制时间8 min。每批投料约5 kg，同法炒制3 批。分别在炮制6，8， 10 min 时取马钱子样品(n= 3) ，得炮制不及( 浅褐色或黄褐色) ，炮制适中( 棕褐色或深棕色)与炮制太过( 深褐色或黑棕色) 的样品。 　　2. 2 机器视觉分析马钱子样品分为生品、炮制不及样品、炮制适中样品与炮制太过样品，采用机器视觉技术对其颜色进行测定。图片的采集统一以白色作为背景，以发光二极管( LED) 灯做光源，拍摄前打开LED 灯60 min，稳定光源，设置相机画质M; 相机参数为快门响应时间1 /60 s，光圈值10，感光度640; 镜头EF-S 60 mm f /2. 8; 选择45 /0 观察条件为最佳测量几何条件，通过计算机进行遥控拍摄。马钱子炮制过程共4 份样品，平行炮制3 批，每份样品中随机挑选完整饮片各100 个进行拍照。在机器视觉特定的、稳定的成像环境中，对上述饮片逐一进行拍照成像，饮片放置于系统视野中央，每个样品饮片获取1 个图像，共获得400 张样品图片。将图片导入颜色识别系统进行特征提取，获取颜色变量H，S，V 数据值。按上述方法重复测定生马钱子6 次，结果显示颜色值H，S，V 的RSD 分别为1. 5%，0. 6%， 0. 5%，说明仪器精密度良好。 　　2. 3 电子鼻分析 　　2. 3. 1 分析参数数据获取持续时间120 s，获取周期1 s，延滞时间600 s，空气流速150 mL·min - 1，注射体积2 mL，注射速度2 mL·s - 1 ; 自动进样器参数为孵化时间600 s，孵化温度60 ℃，冲洗时间120 s，注射器温度70 ℃，搅动速度500 r·min - 1，单次搅动时间5 s，搅动暂停时间2 s。 　　2. 3. 2 样品测定取生马钱子，打粉过3 号筛。精密称取马钱子粉末1. 0 g 置于20 mL 顶空进样瓶中，顶空进样3 批生品( n = 3) 。另取炮制不同程度的马钱子样品