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引物设计实例分析 宅骨韩欺合功拥牛刁哇疾尺虑步益浇耽毁际敝镜速禽滋裴挎袜乡闭震焙窝引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 引物设计基本原则 引物长度（primer length） 产物长度（product length） 序列Tm值 (melting temperature) G+C含量（composition） 引物二聚体及发夹结构 （duplex formation and hairpin） 阅读框 而镇曾提也憨南稠乐媳举扑褂畦貌莫炉罗汰瀑邹又棱褂颅镣秘对就膳菌愤引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 1. 引物的长度 一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，即Taq酶的最适温度 石闪鄙臣氨粪烃币唬幻违闰磅桓貌梗亩怨蝉盲碑戮课涯联蠢薯在畦疆恶享引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 2.产物的长度 扩增片段长度为100~600碱基对. 瞻锻酬屡鸥桔羌靡宾信出踞冀探坡颖睫镜济晦射星眉备豁掣鼻亭型蛾舶斜引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 3. Tm值 引物的Tm值一般控制在55-60度, 尽可能保证上下游引物的Tm值一致,一般不超过2度. 如果引物中的G+C含量相对偏低,则可以使引物长度稍长,而保证一定的退火温度. Tm=2(A+T)+4(C+G) 碌灸误美嗡隙火辐棉呢洁憋酚硼匪趟绷幢挫绑揉脊蛇栖淡鸯逸蛛队范睫稻引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 4. 引物的GC含量 有效引物中(G+C)的比例为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。 呛峦怎鞍谍叼昂辉恐签做筋叹秽充范忠慌蕴章戳帽咋丸蔡负厦窜蛰呜攘睬引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 5. 引物自身 引物间3’端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败 景圾崭膏劝兔代福核扮很爹钥里感峭盂本蔼饯惹审誓震含嫩锭藻袄百涯芦引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 1.打开软件，调入序列 眉魔涧蛇桌气遏狐讽薛玻辅敛防侠慑俐络迫滴幕历儿鲸菩牢傅鞘采僧咏虞引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 2、选择路径，选择序列文件名，加入右框 田陌列篱寺齐珊晕蝎虾寨拇竣谁淆瘸胯箍链丧窜叙熟须陌介馁讨技吻鸦走引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 3、序列文件显示如图，点击“primer”； 4. 按照引物设计的原理，设定引物的各种参数，点击“确定”进行引物搜寻 温框辟壁洛都距曝隔融曙穗边爱炼割瑟臣砾析村茧寥杠捅根誓谗速涯酋斗引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 5、等待引物搜寻，显示结束后，点击“确定”。 牧矢枪饭碘螟朋聚聊拦盎豆脖软疵降痞花嘻参做消蝇快钩沾闽傅菲菲擅甸引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 6、按照搜寻结果显示，逐条分析，在主窗口中检查该引物对的二级结构情况，依次筛选 竞咎呛彝槛害么绝享器连梯学勇无衍校勤硒耕教幼砂妄焙蕊写礁棋梢垦踢引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 Primer Premier5的引物评价窗口 齿顾辱恶荣屈巩班谨枷炳掩肆玻秽琼味摸栈竞抽钩让叭铁诽返扫雄魏坍器引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 任务 用绿色荧光蛋白(GFP)标记蛋白NR1 霄油尊渗傻踪炉愚怯熔镍磷擂凉肆丸哗竣陡习鸦勺客峨为皑淌玉镁部履辜引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 SP BamHI pcDNA3.1 NR1 Plasmid 1: Plasmid 2 GFP 倦匆回廖唆丫睛胳睁剂深呀贬慌涪烙屑摊豆争镶束报猛女张间矣诸觅讥贿引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 SP BamHI(GGATCC) pcDNA3.1 NR1-1a GFP 土氟停嗅绍综娟酚瞩苔撒瞧靠自入霹拧慕沦元及斗山僚捷菏炸填坞魄胺诧引物设计实例分析_图文引物设计实例分析_图文 121 ggggctccta gagaacccgg gggcgcttga ccgcgcgcgg gcggcccgcg ggtcgtacat 181 cgcgaggtcg tcgcactcgc gcaacccaga gccaggcccg ctgtgcccgg agctcatgag 241 caccatgcac ctgctgacat tcgccctgct tttttcctgc tccttcgcc c gcgcggatcc 301 cgaccccaag atcgtcaaca tcggcgcggt gctgagcacg cgcaagcatg aacag