实验二葡萄籽中多酚类物质的提取及含量测定研究报告.ppt

实验二葡萄籽中多酚类物质提取及含量测定 一 实验目的 1 学习并掌握植物组织破碎的方法------研磨法 2 学习葡萄籽中多酚类物质的提取方法 掌握标准溶液和标准曲线的制备 二 实验原理 1 葡萄籽主要含有多酚类物质 (GPS),包括儿茶素 类和原花青素类。其中儿茶素类包括儿茶素 、表儿茶 素及其没食子酸酯 ，是葡萄籽中主要的单聚体 ，也是原 花青素寡聚体和多聚体的构成单位 。 2 在植物体内经生物化学反应而形成复杂的聚合物 ，是一种强抗氧化 剂，其抗氧化功效是维生素C的20倍、维生素E的50 倍 ；具 有 抗 氧 化 及 清 除 自 由 基 、抗 辐 射 、抗 肿 瘤 、抗 衰 老、治疗心血管疾病、提高免疫功能 、预防神经退行性 改变等作用。 二 实验原理 3 常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有: 酒石酸亚铁比色法、香草醛-浓盐酸法、FD 法、FC 法、普鲁士蓝法等。 4 根据反应机理，香草醛为显色剂，与儿茶素在酸性条件下发生羟醛缩合反应，反应产物为红色的半缩醛和缩醛化合物。 5 本实验中采用过量的显色剂和略低于室温（25℃）条件下进行反应，有利提高测定结果的准确性。 三 实验材料、仪器、试剂 葡萄籽 研钵，玻璃棒，烧杯，量筒，水浴锅，电热套，冷凝回流装置，离心机，可见分光光度计等。 蒸馏水，60％乙醇，香草醛，儿茶素，甲醇等 四 实验步骤：1、材料的预处理与研磨 取新鲜葡萄，去皮和果肉后取出葡萄籽作为实验材料。 首先对实验材料进行清洗，用滤纸吸干多余的水分之后，称取1g进行研磨粉碎。 把材料放进研钵内，捣碎研磨，要求研磨的粉末足够细。 2、供试品溶液制备 称取葡萄籽粗粉 1.00g，置 100mL圆底烧瓶中，加60%乙醇溶液 50mL，水浴回流提取2 次，每次30min，滤过，合并滤液，水相转移至100mL 量瓶中，蒸 馏水稀释至刻度，定容。取上述溶液 4mL,离心 30min(12000rpm)，取上清液，备用 。 3、对照品储备液的制备 取干燥的儿茶素对照品，精确称取10.09mg，置于25ml量筒中，加蒸馏水溶解并定容至刻度。既得储备液。 4、儿茶素标准曲线的制作 分别精密移取对照品储备液 0.5mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.5mL、4.0 mL ，置5 mL量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。 分别移取上述不同浓度对照品溶液各 0.5mL，置10mL玻璃试管中(避光)，加入 3.0mL4%香草醛-甲醇溶液和1.5mL浓盐酸，混匀，室温放置显色15min。以纯水为空白，利用722型可见分光光度计 ，在 500nm 下测定吸光度(A)。以儿茶素浓度 (x)为横坐标 ，吸光度 (Y) 为纵坐标 ，绘制标准曲线 ，并求得回归方程。 5、待测样品中活性物质含量测定 取0.5mL上清液，置 10mL玻璃试管中(避光)，加入 3.0mL 4%香草醛-甲醇溶液和1.5mL浓盐酸，混匀，室温放置显色15min。以0.5mL上清液稀释10倍为对照，利用722型可见分光光度计，在 500nm 下测定吸光度(A)。 上清液中生成的有色物质的OD值=A待测- A对照 每克葡萄籽中多酚类物质含量：利用所得的OD值在标准曲线找出对应的含量，然后乘以稀释的倍数即可求的。 五 结果分析