遗传实验参考 遗传学实验报告8_果蝇杂交实验_丛乐.docVIP

遗传学实验报告8 转基因果蝇的杂交重组实验 丛乐 2005011007 生51班 实验组：1-1 同组成员：朱祎 实验日期：2008年3月~2008年5月 I．实验目的 1．根据材料设计合理的果蝇杂交实验方案，进行转基因果蝇的杂交重组实验，按照预定实验方案设计进行果蝇麻醉，处女蝇挑选，果蝇转移和杂交等操作，并按时观察和记录果蝇的状态、生理特征等信息，并鉴定杂交重组结果。 2. 最终把插入在同一个染色体上的不同目的基因通过重组交换整合到同一品系果蝇的同一染色体上，并通过Balancer的作用得到能够稳定保存的品系。 3. 总结和统计实验结果，验证初始实验设想，从而加深对果蝇遗传特征的理解和认识。 II. 实验原理，基本假设和设计思路 本次实验的设计基于转基因果蝇（Transgenic Fly）和带有平衡子（Balancer）的果蝇。 1．实验原理 将带有目的基因、P转座子序列、mini-white基因的质粒通过显微注射转入白眼果蝇卵中，可以获得转基因果蝇（此步操作由唐师姐提前完成，并提供给我们）。质粒上所带的mini-white基因（转基因标记）可使得成功插入目的基因的果蝇个体呈现出红眼（Red Eye）表型。由于mini-white的表达量直接决定果蝇眼睛红色的深浅（取决于目的基因插入位置和拷贝数目），所以可以通过检测果蝇眼睛的颜色直接对目的基因的插入情况进行初步判断和鉴定。 稳定遗传品系的获得则用到带SM6a平衡子(SM6a Balancer)的果蝇。带有该平衡子的果蝇相应的第2号染色体在减数分裂时不能发生重组，从而使得另一条染色体上的基因稳定遗传。该平衡子的有关信息请参见下表1。 表1 本次实验中使用的SM6a Balancer的遗传学信息 染色体 (Chromosome) 平衡子 (Balancer) 显性表型标记 (Dominant Phenotypic Marker) 纯合体特征 (Homozygote Characteristics) 2 SM6a Cy（卷翅） 纯合致死（Homozygous Lethal） 2．基本假设 基本假设是，通过同源重组可以将插入不同品系上的两个目的基因整合到同一条染色体（即2号染色体），并可将重组系和带有SM6a Balancer的品系杂交，筛选获得可稳定遗传的重组系。 3．设计思路和预期结果 初始材料为唐师姐提供的两种转基因果蝇tH和tL，这两个纯合品系中目的基因A和B均位于第2号染色体上，且果蝇眼睛的颜色均为红色。具体杂交方案如下： 第一步，将tH品系（基因型♀A/A）和tL品系（基因型♂B/B）进行杂交，得到F1代，即tHL（基因型A/B），F1果蝇眼睛颜色为橙色。因为此次杂交使用的是两种纯合品系，所以预期F1所有个体的表型和基因型均完全一样。 第二步，将F1代tHL品系雌性果蝇（基因型♀A/B）与带有SM6a Balancer品系的雄性果蝇（基因型♂SM6a/O）杂交，避免雄性不重组现象，可得到所需F2代果蝇。 在F2代中，如果其亲本tHL雌性果蝇（基因型♀A/B）的第2号染色体在减数分裂过程中发生同源重组，使得A和B两个目的基因交换到同一条染色体上，则会产生AB型和O型的卵子，从而最终得到所需要的tRS品系果蝇（RS: Recombinant Stable，基因型AB/SM6a），此类果蝇的表型判断依据为眼睛颜色呈橙色，且为卷翅。用杂交图表示设计方案，如下图1所示： 图1果蝇杂交实验设计方案示意图（F2代中只显示目标品系tRS） 根据预期，在F2代中除少量tRS系的果蝇外，应该还会得到另外七种品系的果蝇： （1）第一种是tRN品系（RN: Recombinant Non-Stable，基因型AB/O，表型橙色眼，正常翅膀）； （2）第二种是tNS品系（NS: Null Stable，基因型O/SM6a，表型白色眼，卷翅） （3）第三种是tNN品系（NN: Null Non-stable，基因型O/O，表型白色眼，正常翅膀） （4）第四种是tHS品系（HS: H Stable，基因型A/SM6a，表型红色眼，卷翅）； （5）第五种是tHN品系（HN: H Non-stable，基因型A/O，表型红色眼，正常翅膀）； （6）第六种是tLS品系（LS: L Stable，基因型B/SM6a，表型红色眼，卷翅）； （7）第七种是tLN品系（LN: L Non-stable，基因型B/O，表型红色眼，正常翅膀）。 其中前3种是由于减数分裂中发生AB基因间重组，使AB交换到同一条染色体上，这样产生的重组型配子杂交后得到此3个品系；后面4种是没有发生此种重组的配子产生的，这些配子可能发生其他区域的重组，但没有使AB交换到同一条染色体上。 所有预期基因型和表现型汇总如下（见下表2和表3）：