染色体生物剂量计.ppt

* Soochow University 染色体畸变是反映电离辐射损伤的敏感指标； 借助剂量效应曲线，估算事故受照人员的剂量； IAEA出版了染色体畸变分析的报告书－－国际公认的可靠、灵敏的生物剂量计； 在辐射事故中，染色体畸变分析估算的剂量不仅与临床表现相符，而且与物理剂量相一致； 用物理方法难以估算剂量时，更显其优越性。 染色体生物剂量计 Soochow University l 适用于均匀、急性全身外照射；不用于内照射、分次照射、长期小剂量照射；局部或非均匀照射，给出相当于均匀照射时的全身剂量当量； l 分析“双着丝粒体＋着丝粒环”； l 取血在事故后48小时内，最迟不超过2月； l 体内存在时间与淋巴细胞寿命、剂量水平、剂量分布、照射持续时间、个体差异等有关； l 剂量估算范围：0.1--5Gy。其最低值，X线约为0.05Gy；r线0.1Gy；裂变中子0.01Gy。 染色体生物剂量计（非稳定性染色体畸变） Soochow University 常见的其他生物剂量测定方法 1：早熟凝聚（PCC）染色体； 2：CB法微核； 3：稳定性染色体畸变（易位）FISH ； 4：HPRT基因位点突变 Soochow University 1、早熟凝聚染色体（PCC）分析： PCC: 当一个分裂中期细胞和一个间期细胞进行细胞融合后，间期核被诱导提前进入有丝分裂期。间期核中极度分散状态的染色质凝聚成染色体样结构，这种纤细的染色体称为PCC（Premature condensed chromosome）。显微镜下，融合细胞中可见诱导细胞的中期染色体和纤细的单股PCC。这一现象称为染色体熟前凝聚（premature chromosome condensation, PCC） Soochow University 2.CB法微核: 微核（micronuclear）：无着丝粒断片（染色体碎片）或在分裂后期落后的整条染色体，在分裂末期不能纳入主核，当进入下一个间期时，它们在细胞质内浓缩成小于主核1/3，着色与主核相同或略浅的小核。 胞浆分裂阻滞微核法(CB法)：培养基中加入胞松素-B,后者不干扰细胞核分裂，但能阻滞胞浆分裂。分裂一次的淋巴细胞的胞浆中出现双细胞核,简称CB细胞。CB细胞大,具有双核,易于鉴别。双核细胞是只经历一次分裂的细胞。 Soochow University MN Soochow University CB法估算剂量范围：0.25-5.0Gy； 受照后微核随时间变化规律:照射后立刻升高,然后保持恒定水平,持续时间不清； 照后尽早采血,不超过一月；? 微核法：直接涂片法、培养法、CB法； 微核仅出现在诱发后经过一次分裂的间期细胞传统微核法不能分辨未转化、分裂一次和一次以上的淋巴细胞,影响微核测试的准确性； CB法计数CB细胞中的微核,可显著提高微核检测的灵敏度和准确性。 Soochow University CB法优点：方法简单,分析快速,易于掌握,有利于自动化分析,尤其在核事故涉及的人员较多时更显示具优越性。 缺点：不像双着丝粒体对辐射敏感、特异；自发率高，1％－2％；个体差异大，自发率与性别无关，与年龄呈正相关，估算剂量下限的不确定性高；衰减速度比双着丝粒体快。 Soochow University 3,稳定性染色体畸变（易位）分析：荧光原位杂交(FISH)技术 利用生物素(biotin)标记的已知碱基序列的核酸作为探针,按照碱基互补的原则,与标本上染色体同源序列进行特异性结合（原位杂交）,然后用荧光标记的生物素亲和蛋白 (avidin)和抗亲和蛋白的抗体进行免疫监测和放大,使探针杂交区发出荧光(显色),形成可监测的杂交双链核酸,最后在荧光显微镜下检查探针存在与否。结合了探针的染色体呈现出特定的颜色,未结合探针的染色体不着色,如着色与未着色的染色体间发生了互换,这种异常的染色体在荧光显微镜下非常容易鉴别。 Soochow University 1 4 FISH *