第13章动物人工繁殖2.pptVIP

第13章 体外受精与核移植动物 为什么要进行动物人工繁殖？ 问题1：2010年5月1日开始上海有什么活动？ 为什么要进行动物人工繁殖？ 大熊猫是我国的国宝，是国家一级保护动物，系濒危物种。 野外大熊猫到了圈养环境中繁殖率非常低，78%的雌性大熊猫不孕。长期以来圈养大熊猫90%的雄性大熊猫不育。 我国20世纪末实行了大熊猫人工繁殖计划。 问题2：“水中大熊猫”是什么？ 对于人类，世界范围内不孕夫妇占10％左右，需要建立人工助孕技术。 动物人工繁殖的技术方法一览： 无性生殖途径 有性生殖途径 胚胎培养 本节主要内容： 1-体外受精动物（试管动物、试管婴儿） 2-核移植动物（克隆动物） 本节关键问题： 1-体外受精动物的培育：精子获能与卵细胞成熟培养、体外受精方法、性别控制的原理与方法 2-核移植动物的培育：核移植、重组胚的激活 1.体外受精动物 1.1 定义 体外受精(In vitro fertilization，IVF)是指将哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。 体外受精动物也称试管动物（test-tube animal），是指将供体的精子和卵子在体外受精，体外培养胚胎发育到一定阶段通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。 人工授精的区别 世界上首批试管动物 1959年，张明觉以家兔为实验材料，从一只交配后12h的母兔子宫中冲取精子(即体内获能的精子)，从另外两只超数排卵处理母兔的输卵管中收集卵子，精子和卵子在体外人工配制的溶液中完成受精过程，然后，正常卵裂的36枚胚胎被移植到6只受体的输卵管中，其中4只妊娠，并产下15只健康仔兔，这是世界上首批试管动物，它们的正常发育标志着体外受精技术的建立。 1.2 优点 （1）发挥优良母畜的繁殖潜力：一头优良品种母牛的卵巢内有几万个生殖细胞，但在一个正常性周期内只有几个卵泡同时发育，最后一个卵泡成熟并排卵。一只良种母畜一生大约只能繁殖10个左右的后代，大部分时间用于妊娠和哺乳。试管动物繁殖技术能够充分利用母体生殖潜力。 （2）促进家畜改良的速度：繁殖能力的提高促进家畜改良速度，加速育种过程。 （3）保存遗传资源：对优良或稀有哺乳动物建立“胚胎库”，进行受精卵或胚胎的长期保存。 例如：“世界山羊之王”体格高大，四肢粗壮，身体丰满。 平均日增重350克，屠宰出肉率可达60%以上。 具有适应性强、采食性广、繁殖性能好、肉用性十分显著等特点。 波尔山羊 1.3 知识回顾 受精1天后才开始卵裂。 8细胞之前，分裂球之间结合比较松散。 接形成致密的球体16细胞期，内部1-2个细胞属于内细胞团，将来发育为胚胎，而其外周细胞变为滋养细胞。 动物的胚胎在64细胞以前为实心体，称为桑椹胚。 继续分裂成由100多个细胞组成的早期胚泡。细胞团内部空隙扩大，成为充满液体的囊胚腔（Blastocele），此时的胚胎称为囊胚。囊胚的大小仍和受精卵相似，但细胞已经增殖到上千个。 1.4 试管动物培育流程 （1）精子采集与体外获能、卵子采集与成熟培养 （2）体外受精 （3）胚胎体外培养 （4）胚胎移植(Embryo transfer，ET)：是指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵、但未经配种的“受体”母畜输卵管或子宫的技术 （5）体内发育、出生 1.4.1精子的采集与体外获能处理 采集：精子上游法采集，在精液上面加入少量培养液，有活力的精子游到表面，收集。 精子获能(Capacitation)是指精子获得穿透卵子透明带能力的过程。 精子的顶起反应：遇到卵子时，精子头部“顶体”脱落，顶体酶释放，使卵子的放射冠和透明带溶解，精子进入卵细胞，达到受精的目的。 体内获能 雄性精液中含有“去能因子”（多是：糖蛋白），附在精子表面，是顶体酶的抑制剂，抑制了精子的受精能力。 去能因子的清除，使精子顶体酶活性恢复，具有受精能力： 主要依靠宫颈、子宫及输卵管液中的β淀粉酶、胰蛋白酶、β葡糖苷酶及唾液酸酶，后者在卵泡液中含量也很高。可以水解糖蛋白等“去能因子”。 体外获能 1951年，美籍华人张明觉和澳大利亚人Austin同时发现了哺乳动物的精子获能现象。 20世纪60年代初至20世纪80年代中期，人们以家兔、小鼠和大鼠等为实验材料，进行了大量基础研究，在精子获能机理和获能方法方面取得很大进展。 精子由最初在同种或异种雌性生殖道孵育获能，发展到用子宫液、卵泡液、子宫内膜提取液或血清等在体外培养获能，最后用化学成分明确的溶液培养获能。牛、羊的精子常用化学药物诱导获能，诱导获能的药物常用肝素和钙离子载体。1986年Parrish等用含肝素的介质处理牛的冷冻精液，然后与体外成熟的卵母细胞体外受精获得成功。 1.4.2 卵子的回收与成熟培养 (1)超数排卵：雌性动物用促卵泡素和促黄体素处理后，