生物学抗体免疫技术.pptVIP

优秀精品课件文档资料 生物技术---免疫学技术 基本概念 抗原（antigen）： 进入动物体内能刺激动物的免疫系统发生免疫应答，从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质 分完全抗原和半抗原 抗体(antibody)： 抗原刺激动物免疫系统，由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白 第三章 免疫学技术 基本概念 抗原的制备：颗粒抗原、半抗原、人工抗原 抗体的制备：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体 第三章 免疫学技术--抗原抗体反应 可对抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测 抗体抗原以非共价键结合 不可见反应：几秒-几分钟 可见反应：数分钟（小时、日） 影响因素 电解质 温度 酸碱度 第三章 免疫学技术 酶联免疫法 放射免疫法 荧光免疫法 其他 第三章 酶联免疫法（enzyme immunoassay) 以酶标记抗体或抗原进行的抗体抗原反应 酶结合物应具有双功能： 高度特异的免疫反应、生物催化放大作用 基本方法 间接法 双抗体夹心法 竞争法 生物素-亲和素系统（biotin-avidin system，BAS） 某些新进展 酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay） 间接法 1、将已知可溶性抗原吸附于载体 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗体的待检液 4、温育后清洗 5、加入酶标记的二抗 6、温育后清洗 7、加入酶作用底物 8、测定反应颜色深浅 双抗体夹心法 1、将已知抗体吸附于载体上 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗原的待检液 4、温育后清洗 5、加入酶标记特异性抗体 6、温育后清洗 7、加入酶作用底物 8、测定颜色反应深浅 酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay） 竞争法 1、将已知抗体吸附于载体上 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗原的待检液和酶标记的已知抗原液 4、温育后清洗 5、加入酶作用底物 6、测定颜色反应深浅 酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay） 生物素-亲和素系统（biotin-avidin system） 基本概念 生物素：是一种维生素H，经活化后，可与抗体、抗原、酶以多 配一的方式共价结合，且不影响它们的活性 亲和素：从卵蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，可与酶偶合，以1配多的方式对生物素有很强的亲和力 BAS用于检测的基本方法： BAB法或BRAB法 BA法 ABC法 酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay） 酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay） 均相酶免疫测定法 无需“固定在载体上”；无需“温育后清洗” 斑点免疫结合试验 以微孔薄膜为载体，酶免疫反应阳性结果在膜上出现色斑点 胶体金标记较酶标记更为简便 酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay） 猪肉和尿液盐酸克伦特罗的 免疫胶体金法快速检测 瘦肉精中毒事件 2000年以来，内地相继发生18起瘦肉精中毒事件，中毒人数达1700多人，死亡1人（不包括上海2006年集体中毒事件） 瘦肉精残留及危害不容忽视，瘦肉精替代品暗潮涌动 上海9.13瘦肉精食物中毒事件（2006年） “瘦肉精”学名为盐酸克伦特罗，医学上又称克喘素，常用于治疗哮喘。 由于盐酸克伦特罗添加于饲料饲喂动物后可明显促进动物生长,提高 瘦肉率, 所以养殖户称其为“瘦肉精”，曾在国内外广泛用于动物饲养 生猪食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，个别会出现腿抽搐，站不 稳，爬坡困难；宰后猪的肌肉特别鲜红，后臀肌肉饱满，肥肉非常薄 瘦肉精介绍 瘦肉精介绍 “瘦肉精”化学性质特别稳定，加热到170℃时才能被分解，故一般家庭厨房加热不能将其分解破坏 食用后在胃肠道吸收快，作用维持时间持久。中毒后主要症状表现为头疼、头晕、心悸、心慌、面色潮红、四肢发抖等症状 违法者使用该物质以提高猪的瘦肉率和颜色鲜艳程度，不知情的市民 错误地认为这样的肉才是“好肉”而特别喜欢选购 《食品卫生法》 《食品添加剂卫生管理办法》（GB2760） 《动物性食品中兽药残留最高限量》（农业部公告第235号， 2002年12月24日）规定：禁用药物，动物性食品中不得检出： 瘦肉精、沙丁胺醇、西马特罗等31种 违法者的法律责