红细胞裂解液法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞.docVIP

红细胞裂解液法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞*****★ 张卫东，章方彪，史宏灿，谭荣邦，叶 钢，李广宇，潘 枢，孙 飞(扬州大学临床医学院，江苏省扬州市 225001) 文章亮点： 1 经红细胞裂解液处理后的骨髓液内含有大量的各种促进细胞生长的因子。红细胞及血小板的胞浆内含有丰富的促细胞生长因子，这些细胞因子可促进骨髓间充质干细胞成集落的簇状生长，为骨髓间充质干细胞的生长提供更适应的微环境，以利于骨髓间充质干细胞的增殖。 2 经红细胞裂解液处理后，骨髓液内细胞杂质明显减少，通过离心纯化，可以得到纯度更高的含有骨髓间充质干细胞的骨髓液，进而可以明显较少骨髓间充质干细胞的原代培养时间，提高骨髓间充质干细胞的增殖速度。 3 实验发现经红细胞裂解液处理后，早期骨髓间充质干细胞的贴壁细胞数量明显较未经红细胞裂解液处理所获得的数量多。 关键词： 干细胞；骨髓干细胞；骨髓间充质干细胞；红细胞裂解液；细胞培养；分离纯化；细胞增殖；细胞生物学；国家自然科学基金；干细胞图片文章 主题词： 干细胞；间质干细胞；细胞，培养的；细胞增殖 基金资助： 国家自然科学基金30972968***；江苏省“六大人才高峰”高层次人才基金(2009128) *；江苏省“青蓝工程”学术带头人基金资助* 摘要 背景：有研究向骨髓液中加入红细胞裂解液来提高分离纯化骨髓间充质干细胞的效率，以期获得纯度高、数量多的骨髓间充质干细胞。 目的：进一步验证红细胞裂解液法体外分离纯化兔骨髓间充质干细胞的增殖特性，并对其进行细胞生物学鉴定。　 方法：使用红细胞裂解液提取含有兔骨髓间充质干细胞的骨髓悬混液，于4，7，10，13 d记录比较原代细胞的生长相对数量；观察传代细胞的生长情况，绘出P2、P3、P4及P5代细胞的生长曲线，比较各代细胞的增殖特点；倒置相差显微镜观察细胞的形态，细胞免疫荧光及流式细胞仪检测所获得细胞的CD44、CD34表面抗原的表达情况。 结果与结论：红细胞裂解液法所获得的兔骨髓间充质干细胞为均一规则的以梭形为主的贴壁细胞，其胞核胞核均质、核仁明显、胞浆丰富，且CD44抗原表达阳性、CD34抗原表达阴性；原代细胞生长曲线呈类“S”型；P4代细胞具有较好的增殖活性，其生长速度、所获取的细胞数量均优于其他代数细胞。说明红细胞裂解液法可以在体外较好的培养出骨髓间充质干细胞，其P4代细胞是骨髓间充质干细胞增殖能力最强的一代细胞。 Red blood cell lysis isolation and culture of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells in vitro Zhang Wei-dong, Zhang Fang-biao, Shi Hong-can, Tan Rong-bang, Ye Gang, Li Guang-yu, Pan Shu, Sun Fei (Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China) Abstract BACKGROUND: Some studies have demonstrated that red blood cell lysate added into the bone marrow can increase the efficiency of isolating and purifying mesenchymal stem cells, in order to obtain high-purity and high-quantity bone marrow mesenchymal stem cells. OBJECTIVE: To isolate and culture bone marrow mesenchymal stem cells of rabbit with red blood cell lysis in vitro for exploring proliferation characteristics and performing the biological identification of cells. METHODS: Bone marrow suspension was collected by puncturing the tibia with medullo-puncture needle. Red blood cell lysis was added to the bone marrow suspension, and bone marr