第一节DNA重组技术的基本工具.pptVIP

DNA连接酶的作用过程 　 DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？ DNA连接酶与DNA聚合酶的异同： 都形成磷酸二酯键； DNA连接酶作用对象是两个双链DNA片段,不需模板， DNA聚合酶作用对象是单个核苷酸和DNA片段,需模板 和引物。 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加 以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 基础上进行过 的 谁能告诉我这是ＷＨＡＴ？ 谁能告诉我这是ＷＨＡＴ？ 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 原理 操作水平 对象 优点 生物体外 基因重组 DNA分子水平 打破物种界限、定向改造生物性状 基因 1.1 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶(限制 酶)——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 来源：主要来自原核生物 功能：识别特定核苷酸序列，切割特定位点 (专一性) 切割方式：错位切，产生黏性末端 平切，产生平末端 识别序列特点： 是回文序列，具旋转对称结构 大都6个核苷酸组成，少数4、5或8个越短，在DNA中出现的概率越大 (磷酸二酯键) （水解） 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 答案：C 2.下列四条DNA分子，彼此间具有黏性末端的一组是 A．①② B．②③ C．③④ D．②④ 答案：D 3、某目的基因有两个EcoRⅠ酶切位点，画画目的基因被切割所形成的黏性末端？ --GAATTC-----GAATTC----- --CTTAAG-----CTTAAG----- EcoRⅠ酶 --G --CTTAA AATTC-----G G-----CTTAA AATTC--- G--- + + 作用：可以把两种来源的DNA（用同一种限制 酶切割）的黏性末端黏合起来。 二 、 DNA连接酶——“分子缝合针” 点击播放 结果：脱水缩合形成磷酸二酯键 种类:（根据来源不同分为） E·coli DNA连接酶，只能连接黏性末端 从大肠杆菌中分离得到 T4DNA连接酶，既可连接黏性末端，又可连接平末端 从T4噬菌体中分离出来 (效率较低) DNA连接酶——“分子缝合针” 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 标记基因，便于进行检测。 最常用的载体，广泛地存在于细菌中，是独立于细菌拟核DNA之外