PCR技术讲座课件.pptVIP

Contents PCR:（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应在体外模拟体内DNA复制的环境配制适当的缓冲体系然后加入各种组分:模板DNA，四种核苷酸，Mg2+,DNA聚合酶，上下游引物，通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环来扩增模板DNA。每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 扩增了特异区段的DNA带。 cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5‘和3’末端的有效方法。经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端，包括单边PCR和锚定PCR 巢式PCR（nested PCR），是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。 在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。 1）PCR buffer: 500mM KCl, 1