科研部技术指导一览表.doc-南京鼓楼医院.doc

科研部目前能提供技术指导一览表 根据科技处领导要求，现列出科研部能开展的各项实验室技术详细清单，以增进相关人员对科研部的了解，提高科研部实验室的使用效率。 需要特别说明的是，实验室技术与研究项目的内容密切相关，但实验室技术名称不等于研究项目或研究内容名称。我们只能列出各项实验室技术名称，而无法列出研究内容或项目的名称，用实际例子说明如下。 例如，“某基因单核苷酸多态性与某种疾病易感性的关系”，这属于研究项目的名称，其中的基因单核苷酸多态性检测需要在实验室完成，其方法至少有10种以上，而任何一种方法，都包括多种实验室技术，其中最基本的标本留取和处理，就需要考虑以下至少5个方面： 1）留取什么组织标本：通常为外周血； 2）留取外周血：是否需要抗凝，最好抗凝（不抗凝的血标本也可以用，但对后续实验带来很大麻烦）； 3）用什么抗凝剂：最好用EDTA或枸橼酸钠（用肝素也可以，但价格高，且有可能影响后续实验）； 4）采血量：根据多态性位点数目、多态性位点检测方法等而定； 5）血样处理（这涉及试剂配置、移液器使用、离心、标本保存等各种技术）： a．何时处理：最好当天，甚至需立即处理，也可以在1－2周甚至更长时间后处理；这需要综合考虑，如血细胞和血浆是否需要用于检测其他指标，这些指标是否受标本处理时间的影响，……； b．如果不能及时处理，如何保存：4oC保存，室温保存1－2天也可以，但未处理的抗凝血切忌冻存，因为冻融后红细胞溶血，部分白细胞也会裂解，影响后续实验，……； c．如何处理：需要综合考虑，是否需要保存血浆，是的话，先离心，吸取血浆，保存；再裂解红细胞，留取白细胞，分装……，保存……。 因此，此清单仅作为参考，不能机械地根据此清单判断科研部能否对您的课题提供技术支持。请在课题开始前，电话或来科研部咨询相关事项。根据需要，我们也可以派人到贵科室提供咨询服务。另外，因为实验室技术的通用性，此清单中未列出的项目，只要没有仪器或试剂的特殊要求，本部门多数也能开展。 鼓楼医院科研部 2016.1.18 一、实验室基本技术： 试剂瓶和实验器材的清洗 试剂选择 试剂称量与配制 血液、组织等样本的收集与保存 仪器或设备的使用：具体仪器和设备见清单，使用时请参见本实验室各仪器的SOP。 二、分子生物学相关技术： 人及各种动物基因组DNA抽提、浓度测定 人及各种动物组织或细胞RNA提取、浓度测定 琼脂糖凝胶电泳（DNA；RNA） 琼脂糖凝胶DNA回收 RNA电泳 Southern blotting (DNA转印技术) Northern blotting (RNA转印技术) 普通PCR 巢式PCR 逆转录PCR 荧光定量PCR 梯度PCR PCR产物（DNA片段）纯化 基因突变（点突变或缺失突变）技术 感受态细胞制备 DNA连接 DNA克隆 （T-A克隆、质粒构建等） 质粒DNA制备 质粒抽提 MicroRNA、mRNA检测 基因过表达 基因沉默 引物设计 DNA测序 DNA片段分析 SNP检测 分子克隆技术：蛋白原核和酵母表达质粒构建、蛋白原核表达、纯化 三、蛋白质相关技术： 各种组织裂解及蛋白抽提（总蛋白、胞浆蛋白、膜蛋白及核蛋白提取） 蛋白质定量 SDS电泳及考马斯亮蓝染色 蛋白表达质粒构建、蛋白原核表达、纯化（盐析、亲和层析等） 蛋白真核细胞（包括哺乳动物细胞、酵母细胞）的表达和纯化 蛋白质超速离心分析：密度滴度离心、浮力密度分析、微量蛋白浓缩、纯化等 四、免疫学分析技术（检测各种抗原、抗体、各种蛋白质分子）： ELISA 免疫组化 HE染色 免疫沉淀 免疫荧光 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH） Western blotting (蛋白质转印技术) 液相芯片分析检测各种细胞因子 固相酶联免疫斑点技术 免疫动物的抗原制备 五、细胞学分析技术（用于各种以细胞为基础的研究）： 传代细胞培养、复苏和冻存 原代细胞分离与培养 细胞转染技术 细胞增殖检测 细胞毒性检测 细胞凋亡检测 细胞周期检测 细胞迁移/划痕实验 细胞转染和筛选 流式细胞仪检测 流式细胞仪分选细胞 免疫磁珠分选细胞 细胞氧化应激检测 人和各种动物外周血淋巴细胞分离 细胞核提取 线粒体提取 干细胞原代培养和鉴定（免疫标记鉴定、成骨、成软骨、成脂鉴定及尼氏体检测等） 六．组织病理切片和显微镜分析技术：用于各种形态学成像分析 1）包括石蜡切片及冰冻切片 2）普通光学显微镜术：常规切片、免疫组化等 3）普通光学倒置显微镜术：培养瓶或板的常规观察或免疫组化等 4）普通荧光显微镜术：常规切片的免疫荧光分析等 5）普通荧光倒置显微镜术：细胞培养瓶或板的免疫荧光分析等 6）激光共聚焦