蔗糖酶活力测定－二硝基水杨酸法.pptVIP

实验四 蔗糖酶活力测定 ——3.5－二硝基水杨酸法 * * 一、实验目的和要求 1、掌握酶活力测定的基本原理和方法； 2、学习酶的比活力的计算。 二、实验基本原理 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。因此，每水解1mol蔗糖，就能生成2mol还原糖。还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉（Nelson-Smogyi）试剂比色法，斐林试剂法等。 本实验采用3.5－二硝基水杨酸法测定还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5－二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。因此可利用分光光度计在500nm进行比色测定，求得样品中的含糖量。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。 蔗糖酶活力单位(u)： 蔗糖酶在室温(50℃）, pH4.5的条件下，每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需的酶量(ml)。 蔗糖酶比活力的计算： 酶的比活力——为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数，一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质