基因工程与食品产业课件.pptVIP

常用的受体细胞以细菌为主，其中主要有大肠杆菌、枯草杆菌 重组DNA导入受体细胞的方法有： （1）转化：是将重组质粒DNA导入受体细胞，使受体遗传性状发生改变的方法； 转化是使重组体DNA分子在热休克的短暂时间内被导入受体。热休克后将受体菌在不含抗生素的培养液中生长至少30分钟以上，使其蛋白得到足够表达，以便能在含抗生素的琼脂培养平板上生长。由于E.coliX1776菌株用CaCl2处理后制备的感受态细胞长期冷藏仍能保持其摄取外源DNA的能力，故常用作受体菌。 （2）转染：是指噬菌体、病毒、或以其为载体构建的重组DNA导入细胞的过程。 (其中又分磷酸钙沉淀法与体外包装法) 磷酸钙沉淀法?? 利用磷酸钙-DNA共沉淀，把外源基因与λ噬菌体DNA的重组分子导入大肠杆菌和哺乳动物细胞，简称磷酸钙沉淀法。细胞具有摄取磷酸钙沉淀的双链DNA的能力，几乎所有的双链DNA都可以通过这种方法导入细胞，而且可在电子显微镜下清楚地看到细胞吞噬DNA-磷酸钙复合颗粒。此法的转染效率远远不如体外包装法。 体外包装转染法 ? 体外包装：指在体外将重组DNA放置到噬菌体的蛋白质外壳里，然后通过正常的噬菌体感染过程，将它们导入宿主细胞。将重组DNA噬菌体包装成噬菌体颗粒，使其能够感染细菌，并在宿主菌体内扩增和表达外源基因。 （2）转染：是指噬菌体、病毒、或以其为载体构建的重组DNA导入细