薄层色谱-光度法测定灵芝孢子油中的总三萜含量-SunYat-sen.doc

第4卷 第3期 中 国 食 品 学 报 Vol.4 No.3 2004年9月 Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology Sep.2004 薄层色谱-光度法测定灵芝孢子油中的总三萜含量 王江海 袁建平 徐世平 刘 昕 (中山大学国家教育部食品工程研究中心广州510275 摘 要 灵芝三萜类化合物是灵芝孢子油中的主要功效成分。本文提出了一种测定灵芝孢子油中总三萜含量的可靠方法，即薄层色谱(TLC)-光度法。该测定方法能准确测定灵芝孢子油样品中的总三萜含量，且其准确度明显高于直接光度法。实验结果显示，直接光度法的测定结果具有明显的正偏差。 关键词 灵芝孢子油 总三萜 薄层色谱-光度法 文章编号 1009-7848(2004)03-0076-04 灵芝孢子油是采用先进的超临界二氧化碳流体萃取技术从破壁的灵芝孢子中萃取得到的油状脂质物。目前在灵芝和灵芝孢子油中已发现120多种灵芝三萜类化合物，因其化学结构的多样性 而具有广泛的药理活性[110]。最新研究表明，灵芝孢子油中的脂质活性物质具有显著的抑制肿 瘤[1112] 和抗艾滋病毒的活性[12]。近年来，灵芝孢子油产品已成为高档保健品中的珍品。 HPLC)和薄层色谱TLC)－液相色谱/质谱LC/MS）法是测定灵芝孢子油中三萜类化合物和总三萜含量准确有效的分析方法[13]。由于获得高纯度的灵芝孢子三萜类化合物 标准品的技术难度大，目前仅为极少数研究机构 所掌握。总三萜含量的常规测定方法是以熊果酸 等三萜类化合物为对照品，用冰醋酸香草醛和高氯酸为显色剂，用光度计直接测定总三萜的含 量[14]。该方法已被用于不同灵芝中总三萜含量的 测定[15]。然而，当采用上述方法直接测定灵芝孢子油中总三萜含量时，由于出现较强的干扰，其结果存在明显的正偏差。用薄层色谱灵芝孢子油灵芝孢子油中总三萜含量1 实验材料和方法 1.1 试剂和药品 熊果酸标准品由中国药品生物制品检定所提供；薄层层析板为天津市天河医疗仪器公司产品；高氯酸分析纯为天津市西青鑫源化工厂产品；冰醋酸分析纯、二氯甲烷分析纯、甲醇分析纯、三氯甲烷分析纯和石油醚分析纯等为汕头西陇化工厂产品；乙酸乙酯分析纯为中国医药上海化学试剂公司产品。 1.2 灵芝孢子油样品 1.2.1 灵芝孢子油产品萌动激活纯灵芝孢子油LINGZHI MASTER）由深圳学者生物有限公司 提供；从国内和香港购得两个品牌的灵芝孢子油 产品；茶油为市售，作为分析对照品。 1.2.2 灵芝孢子脂质提取物称取由中山大学国 家教育部食品工程研究中心提供的破壁灵芝孢子 原料18.5543g，置于100m甲醇二氯甲烷1:3)混合溶剂中，超声振荡30后进行过滤，残渣再以100m混合溶剂提取，并按此实验步骤重复提取4次。 超声振荡和提取4次后的残渣再用索氏抽提 器抽提，并以三氯甲烷为溶剂抽提72。合并上述所有提取液，在50(C温度下减压旋转蒸馏以除去溶剂，得浅金黄色油状的灵芝孢子脂质 提取物。 1.3 测定方法 1.3.1 标准曲线的绘制取熊果酸标准品1.15mg， 77 溶于10.00m乙酸乙酯中，混合均匀得标准溶液。分别吸取0.00 、0.10 、0.20 、0.40 、0.60 、0.80 、1.00 和1.20mL标准溶液，在100(C水浴上蒸干后加入0.40m 5％香草醛冰乙酸溶液和1.00m高氯酸，60(C水浴中加热15后移入冰水浴中，并加入5.00m冰乙酸，摇匀后置于室温。15后用分光光度计在548.1nm波长下测定吸光度。根据测定结果绘制标准曲线。 1.3.2 直接光度法测定取灵芝孢子油样品5.00 ~10.00 mg，溶于10.00mL乙酸乙酯中。分别吸取一定体积的该溶液，在100(C水浴上蒸干后加入0.40m 5％香草醛冰乙酸溶液和1.00m高氯酸，60(C水浴加热15后移入冰水浴中，加入5.00mL冰乙酸，摇匀后置于室温。15后用分光光度计在548.1 nm波长下测定样品溶液的吸光度。 1.3.3 TLC光度法测定用减重法称取一定量样品，溶于少量乙酸乙酯中。点样于活化硅胶G板20cm(20cm(0.25cm）上，以熊果酸标准品作参比，用石油醚乙酸乙酯95:5）展开。Rf值为0.6~1.0的部分为甘油酯，Rf值为0~0.6的部分为三萜类化合物。用乙酸乙酯洗脱，氮气吹 干，分别称重。 取含三萜类化合物部分Rf值为0~0.62.00~10