分子克隆上的标准配方.docVIP

分子克隆上的标准配方 PBS：10×，1000 ml 137 mmol/L NaCl MW：58.44 80 g 2.7 mmol/L KCl MW：74.55 2 g mol/L Na2HPO4·12H2O MW：358.14 36 g mmol/L KH2PO4 MW：136.09 2.4 g 10×储存液：1000 ml ddH2O溶解80 g NaCl，2 g KCl，36 g Na2HPO4·12H2O，2.4 g KH2PO4，室温保存。 1× 工作液：使用时取出100 ml 10× PBS，加ddH2O至800 ml，HCl调节pH至7.4，加入ddH2O定容至1000 ml。 PBS: 1.16 g Na2HPO4, 0.1 g KCl, 0.1 g K3PO4, 4 g NaCl (500 ml distilled water) pH 7.4. Running Buffer：10×，1000 ml 25 mmol/L Tris MW：121.14 30.3 g 250 mmol/L Glycine MW：75.07 187.7 g 0.1%（m/V）SDS 10 g 10×储存液：900 ml ddH2O加入30.3 g Tris，187.7 g Glycine，10 g SDS，60°C加热搅拌促进溶解，定容到1000ml，室温保存。 1× 工作液：使用时取出100 ml 10× Running Buffer，加入ddH2O至1000 ml。 注意回收利用。 Transfer Buffer：10×，1000 ml 24 mmol/L Tris MW：121.14 29.1 g 192 mmol/L Glycine MW：75.07 144 g 20% methanol 10×储存液：1000ml ddH2O溶解29.1 g Tris，144 g Glycine，室温保存。 1× 工作液：使用前取出100 ml 10× Transfer Buffer，加入200 ml methanol（若蛋白分子量较大如超过100kDa，加入100 ml methanol即可），加入ddH2O定容至1000 ml，4°C预冷。 注意回收利用。 TBS：10×，1000 ml 137 mmol/L NaCl MW：58.44 80 g 2.7 mmol/L KCl MW：74.55 2 g 25 mmol/L Tris MW：121.14 30 g 10×储存液：1000 ml ddH2O溶解80 g NaCl，2 g KCl，30 g Tris，室温保存。 1× 工作液：使用之前取出100 ml TBS，加入ddH2O定容至1000 ml，加入1 ml Tween-20混匀。pH调至7.4。 5．1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8） Tris (MW121.14) 45.43g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。 6．0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8） Tris (MW121.14) 15.14g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至所需点，最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温保存。 PH HCl 7.4 约17ml 7.5 约16m 7.6 约15ml 8.0 约10ml 8．1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g 异丙醇 100ml 溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。 9． 0.2mol/L NaH2PO4 NaH2PO4（MW119.98） 12g 蒸馏水至 500ml 溶解后，高压灭菌，室温保存。 10．0.2mol/LNa2HPO4 Na2HPO·12H2O（MW 358.14） 71.6g 蒸馏水至 1000ml 溶