食品现代仪器实验指导2016课稿.doc

食品现代仪器分析实验指导 福州大学生物科学与工程学院 吴佳 2016年 5月实验一 苦味饮料中硫酸奎宁的荧光法测定 1. 目的意义 喹啉结构是苯并吡啶即一个苯环与一个吡啶环稠合而成奎宁是喹啉的， 奎宁是金鸡树皮中含有的苦味晶状粉末抗疟疾药疟疾曾是热带、亚热带地区猖獗流行的疾病，曾夺走成千上万人的生命。17世纪末，奎宁由欧洲传入我国，曾称为“金鸡纳霜”，当时是非常罕见的药。后来，瑞典纳尤斯对这种植物的树皮进行了认真的研究，提取了其中的有效成分金鸡碱，起名为“奎宁”。“奎宁”这个词在秘鲁文字中是树皮的意思。1945年，奎宁才实现了人工合成。在饮料中奎宁是调味料，主要用在滋补品和苦柠檬水中疟疾汤力水是Tonic Water的音译，又叫奎宁水、通宁汽水。是苏打水与糖、水果提取物和奎宁调配而成的。奎宁饮料以其微苦的口味成为畅销的解渴饮料，特别是在夏季人们大量饮用，大量消费含奎宁成分的饮料对一些体有害，新陈代谢紊乱或对这种物质有超敏性的人要避免摄取奎宁特别是孕妇。对怀孕期间每天饮用一升以上奎宁饮料的孕妇进行的调查显示，出生后24小时，新生儿就出现神经战栗症状，在他们的尿液中发现了奎宁成分，但2个月以后这些症状就不存在了。 2. 原理： 本实验包括荧光光谱和激发光谱测定，以及苦味饮料中硫酸奎宁含量测定。硫酸奎宁是强荧光性物质，在紫外光照射下，会发射蓝色荧光。在稀溶液中荧光强度与硫酸奎宁浓度成正比，可根据荧光强度求出硫酸奎宁浓度。 荧光(发射)光谱： 固定激发光波长和强度，在不同的波长下测定所发射的荧光强度，以发射波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标，所作曲线为荧光发射光谱。 荧光发射光谱是选择最大荧光发射波长的依据。 荧光激发光谱： 固定荧光发射波长(一般在最大发射波长处)，改变激发光波长，得出不同激发波长的荧光强度，以激发光波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标，所得曲线称为激发光谱。 荧光激发光谱是选择最大激发波长的依据。 3. 仪器 970CRT荧光分光光度计。 4. 试剂 (1) 0.05 mol/L硫酸溶液。 (2) 0.1 mol/L硫酸溶液。 (3) 硫酸奎宁储备液：称取100 mg硫酸奎宁，用0.05 mol/L硫酸溶液溶解并移入100 mL容量瓶中，稀释定容至100 mL，将其储于棕色瓶中(此溶液存放于冰箱中可保存长久。若溶液变浑浊，则需要重新配制)。此溶液浓度为1 mg/mL。 (4) 硫酸奎宁应用液：取硫酸奎宁储备液1 mL用0.05 mol/L硫酸溶液稀释定容至100 mL，此溶液含硫酸奎宁10 ?g/mL。 5. 操作方法 (1) 标准溶液的配制?g/mL硫酸奎宁标准溶液（即应用液）：0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL，分别置于各容量瓶中，用0.05 mol/L硫酸溶液稀释并定容。此系列硫酸奎宁浓度分别为0.00，0.200，0.400，0.600，0.800，1.00 ?g/mL（标记为1-6号）。 (2) 荧光发射光谱的制作 用少量6号1.00 ?g/mL浓度的硫酸奎宁液润洗比色皿，然后将该浓度的硫酸奎宁液注入荧光比色皿中（2/3即可），将比色皿放入荧光分光光度计的固定槽中。依次点击操作界面菜单上的定性分析→图谱扫描→参数设定打开设定对话框，设定固定激发光波长(EX)为350 nm；发射波长(EM)扫描范围350－800 nm；扫描速度：高速；灵敏度：2；激发光狭缝宽度：10 nm；发射光狭缝宽度：10 nm。参数设定完毕，点击开始扫描按钮，扫描发射波长，得到以发射波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标的荧光发射光谱图。点击保存按钮，在指定的文件夹中，以自己“学号未尾3位+姓名+a”为文件名进行保存。(注：请按以上文件名保存，以便教师实地查验。)点击退出按钮，退出对话框。 依次点击操作界面菜单上的定性分析→图谱分析→打开谱图，点击刚保存的文件(使文件呈蓝色)，依次点击选中→确定，从打开的荧光光谱图右边表格中找出最大发射波长(EM)，并记录于后面的表格中。退出对话框。 (3) 荧光激发光谱的制作 点击操作界面菜单上的定性分析→图谱扫描→参数设定打开设定对话框，固定荧光发射(EM)波长(以所得最大发射波长设定)；激发光(EX)波长扫描范围：200－400 nm；扫描速度：高速；灵敏度：2；激发光狭缝宽度：10 nm；发射光狭缝宽度：10 nm。扫描激发光波长，制作以激发光波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标的荧光激发光谱。点击保存按钮，以自己“学号未尾3位+姓名+b”为文件名进行保存。点击退出按钮，退出对话框。 依次点击操作界面菜单上的定性分析→图谱分析→打开谱图，点击刚保存的文件(使文件呈蓝色)，依次点击选