细胞钙信号转导-WLL-2014课稿.ppt

Intracellular Ca2+ Signaling Wang Linlin Ph.D Department of Physiology Zhejiang University School of Medicine Physiological Function of Ca2+ Physiological Function of Ca2+ 参与神经肌肉的反应过程 镇静作用：缺钙可引起神经的兴奋性增高 调节细胞功能，激活蛋白激酶，促进蛋白质磷酸化 促进内、外分泌腺的分泌，神经介质的分泌 参与血液的凝固 维持细胞膜的通透性及完整性是十分必要的 参与免疫反应 其他 Ca2+的测定方法 （1）血清钙的测定 5种方法：即滴定法、比色法、火焰法、离子选择电极法、活化分析法。 （2）细胞内钙的测定： 光谱荧光法（fluoromotric） 利用单波长或双波长荧光分光光度计，应用荧光指示剂Quin-2／AM或Fura-2／AM测定细胞内Ca2+浓度，这是目前研究Ca2+在生命科学中的生理生化功能的有力武器。 血Ca2+浓度与Ca2+的转运 血浆Ca2+浓度正常维持在8.5 - 11.1 mg ％之间，其中46 ％与血浆蛋白特别是白蛋白结合，47.5 ％为游离钙(Ca2+)，仅有6.5 ％的钙以磷酸钙、柠檬酸钙、重碳酸钙、酒石酸钙、棕榈酸钙等复合物形式存在。只有血浆离子钙才具有生理活性。 正常人的血浆Ca2+不是固定的，每日可有 ? 0.1 mg／dl的变化范围。 影响血Ca2+的因素 来源：食物 三个主要靶器官：肾、肠、骨 其他影响因素 激素对Ca2+转运的作用 3种激素：PTH, l，25-(OH)2-D3 , CT 此外生长激素、甲状腺素、性激素、前列腺素等也有调节血浆Ca2+的作用 细胞内Ca2+的分布 胞内钙的分布极不均匀 细胞内总钙浓度约为l mmol／L 50 ％存在于细胞核 线粒体占30 ％，浓度为0.6 mmol／L 内质网占14 ％，约0.28 mmoI／L 质膜(外层)占5 ％，约0.1 mmol／L 而细胞溶质中仅占总钙的0.5 ％(结合态)或0.005 ％(离子态) 静息状态下的Ca2+梯度 Initiation of intracellular Ca2+ signal 心肌细胞钙火花是肌浆网上一个或几个成簇状分布的RyR所产生的局部钙释放,可通过单个L 型钙通道开放所触发或自发发放 钙火花呈随机发放,出现在Z线附近,其动力学特征受多种因素的调节 T 型钙电流、Na+ /Ca2+交换、ICa(TTX)和IP3 等也是钙火花触发的来源 Ca2+研究背景 蛙心灌流 (Ringer, 1883) 跨膜电流 (HeillbriunnKamada ,1953) 膜片钳单通道技术 (Neher Sakmann, 1978) Fura-2荧光探针 (Tsien, 1985) How to study ? Voltage Clamp Patch Clamp Apoptosis and Ca2+ abnormity 细胞凋亡（apoptosis）：由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程称为细胞凋亡。 胞浆内Ca2+池耗竭及胞外Ca2+内流 Ca2+升高 是细胞凋亡的信号 胞浆内Ca2+池耗竭,但是胞浆内Ca2+不升高细胞凋亡 Ca2+超载与缺血性损伤 calcium overload：各种原因引起的细胞内钙含量异常增多并导致细胞结构损伤和功能代谢障碍的现象，称为钙超载。 缺血后再灌注时细胞内Ca2+超载的机制尚无定论，但可能与下列因素有关 ①电压依赖性钙通道； ②质膜钙泵； ③Na+-Ca2+交换； ④线粒体； ⑤肌浆网； ⑥细胞内蛋白或阴离子结合的钙； ?结合于质膜糖被的钙 细胞内Ca2+ 浓度引起细胞损伤和死亡的可能机制 氧自由基的产生 NO过度生成 Ca2+依赖性蛋白激酶的激活 内源性核酸内切酶激活 线粒体破坏 酸中毒 Ca2+超载对老年性痴呆细胞凋亡的调控 钙离子可通过活化核酸内切酶、激活Ca2+ CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ，参与多种凋亡基因的调控，老年性痴呆神经元的丧失可能与凋亡有关。 老年性痴呆的神经细胞的凋亡中抑制凋亡的基因主要是Bcl-2、Bcl-x基因，而诱导凋亡的基因主要有Bsx、Bak、Fas等。 脑的衰老与Ca2+关系 （1）静息状态下突触体内［ Ca2+ ］增加； （2）去极化引起的突触体内［ Ca2+ ］大量增加； （3）去极化后Ca2+清除速度降低； （4） Ca2+转运机制障碍。 Ca2+流失与老年性osteoporosis