药物体外抗菌试验药物体外抗试验菌试验.ppt

实验六 主 要 内 容 药物体外抗菌试验 MIC及MBC的测定 教师讲解 药敏试验——纸片法（大肠/金葡） 1组/2人 药物的细菌和霉菌总数测定 4人/组 体外抗菌试验 ：能抑制测试菌生长的最低药物浓度即为MIC。 ：能杀死测试菌的最低药物浓度即为MBC。 连续稀释法（MIC） 琼脂扩散法（K-B纸片法） MIC及MBC的测定 不含药的平板 MBC 纸片法的原理 K-B纸片法 无菌吸管少量菌液滴加于平板培养基（MHA）中央（2滴）； 涂布棒将菌液涂开； 做好标记；镊子夹取相应药物纸片贴于含菌平板表面； 37℃培养箱内倒置培养24h； 测量抑菌圈直径（3次取平均值）,并对照NCCLS的解释标准（105页）来判断试验菌的药敏性。 药物的细菌和霉菌总数测定 为什么要检定药品中的细菌和真菌总数 ？ 细菌菌落总数（ Colony Form Unit，简写CFU ），指每克或每毫升待检药品内含有的活菌总数。 如何做口服药物中细菌总数的测定？ 无菌操作取供试药品1 g或1mL，取10 mL无菌生理盐水，在无菌研钵中加入药品和少量pH7.0无菌氯化钠–蛋白胨缓冲液，将药品研碎，再将剩余的pH7.0无菌氯化钠–蛋白胨缓冲液全部倒入并研匀，制成的均匀1：10（ 10-1 ）供试液。 如何做口服药物中细菌总数的测定？ (2)分别用无菌吸管吸取1：10（ 10-1 ）的供试液1mL和9mL 无菌氯化钠–蛋白胨缓冲液加入试管中，制成l：100（ 10-2）的稀释液，同法制成l：1 000（ 10-3 ）的稀释液。 如何做口服药物中细菌总数的测定？ (3)吸取每个稀释级的液体加入培养皿中，每皿加lmL。然后在每个培养皿中，加入15 mL已溶化并冷却至45℃的肉汤琼脂培养基。摇匀，待凝固后，倒置于37℃的恒温箱中倒置培养。细菌2天，霉菌5天。并做阴性对照。 如何做口服药物中细菌总数的测定？ (4)计算每个平板上生长的菌落数，选择菌落数小于300之间的平板计算，菌落数乘以稀释倍数，求得每克或每毫升供试品中所含的菌落总数。 注意 1 无菌操作。 2 不同稀释剂不可使用同一吸管。 3倾倒培养基时温度不宜过高。 4培养时培养基要倒置。 5 做阴性对照。 * *