食品饲料中氨基酸的测定王金娥.pptVIP

食品（饲料）中氨基酸的测定王金娥 目录 一、氨基酸分析仪简介 二、氨基酸 三、氨基酸分析仪基本分析原理 四、氨基酸分析仪法与HPLC的比较 五、样品的制备 六、影响氨基酸分析的各种因素 七、应用 日立氨基酸分析仪简介 一、氨基酸分析仪： （一）氨基酸分析仪的构成（见图1) （二）氨基酸分析仪的流程图（见图2) （三）特点 日立氨基酸分析仪的构成、流程图及特点 （一）氨基酸分析仪的构成 1、输液单元（泵与管路） 作用：输送缓冲液、反应液在流路系统中流动。 2、进样单元（自动进样器） 作用：将样品在流动相的带动下送入仪器体系中。 3、分离单元（离子交换柱、柱温箱） 作用：主要是样品的分离、将混合的样品分离成单一组分。 4、反应单元（反应柱、反应温度加热设备） 作用：被分离的单一组分物质与反应液在反应单元反应、生成可检测物质。 5、检测单元（分光光度计） 作用：准确检测单一组分物质的电能信号（mv). 6、程序控制、数据处理（工作站） 作用：仪器的运行程序控制、检测结果的处理。 从图、表面看（1）自动进样器（2）泵1、泵2单元（3）电磁阀（4）除气（5）废液槽（6）检测器（7）氮气单元（8）柱温箱（9）过滤器（10）混合器（11）反应柱单元（12）试剂和清洗液（13）保护罩。左侧：电源开关。后部 通讯接口、电源连接器、氮气源连接器。 (二）氨基酸分析仪流程图 见图（2） （三）日立氨基酸分析仪特点 氨基酸 二、氨基酸 （一）氨基酸的定义 （二）氨基酸的分类 （三）氨基酸的化学性质 自然界中的氨基酸种类很多，但组成蛋白质的氨基酸只有20多种，从结构式上来看组成蛋白质的氨基酸除甘氨酸以外，都有一个不对称碳原子、即a-碳原子，a-碳原子有四个不同的取代基：COOH羧基、NH2氨基、H氢原子、和R基团，不同氨基酸的R基团不同。氨基酸的R基团又称为侧链，由于不同氨基酸的侧链不同它们的分子量、解离程度和化学反应、性能均不同。除甘氨酸外每种氨基酸都有L-构型、D-构型。蛋白质中的氨基酸都是L-型的，从形状 上看氨基酸是无色的结晶物质，它们在水溶液中显中性、微酸性或微碱性。蛋白质成分中任何氨基酸均可用图中的通式来表示（脯氨酸除外）：见下图 （一）氨基酸的定义 （略） （二）氨基酸的分类 它的分类有两种： 1.按氨基酸具有的酸性和碱性基团的多少分类： 2、按人体营养的需求又可分为必需氨基酸、半必需氨基酸及非必需氨基酸 （三）氨基酸的化学性质 氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它们都能产生氨基与羧基的一般反应，如脂化、甲基化、乙酰化以及酸碱的中和作用等。有些氨基酸由于存在其它基团而产生特殊反应，如半胱氨酸的巯基（－SH) 氨基酸的化学反应 与茚三酮反应：茚三酮与氨基酸一起加热，形成深兰紫色复合物, 最大吸收波长为570nm 与茚三酮反应 氨基酸与水合茚三酮共同加热被氧化分解产 生CO2、氨和比氨基酸少一个碳原子的醛， 此时茚三酮被还原。在弱酸性溶液中，还 原茚三酮与氨及另一分子茚三酮缩合成蓝 紫色化合物茚二酮胺（DYDA）DYDA在570nm 处有最大吸收。 脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物 质，在440nm处吸收峰最大。 除氨基酸以外，如NH2肽类也可与茚三酮反应 生成有色物质（这种反应机理现应用于我们 使用的氨基酸分析仪之中）。 氨基酸分析仪分析原理 三、氨基酸分析仪基本分析原理 （一）离子交换柱 （二）离子交换树脂 （三）离子交换原理 （四）氨基酸分析仪洗脱过程 氨基酸分析仪与HPLC法的比较 四、氨基酸分析仪与HPLC法的比较 （一）OPA法（邻苯二甲醛） （二）PITC法 （三）D—CL法 （四）2-4—二硝基氟苯法 氨基酸分析仪与HPLC常规比较 样品的制备 五、样品的制备 （一）蛋白质的水解 （二）游离氨基酸样品的制备 （三）生理体液样品的前处理 （一）蛋白质的水解： 用于全氨基酸测定的样品，凡是以蛋白质形式存在的都要进行水解处理，水解方法有三种： 1、酸水解法：标准水解法，是普遍采用的水解方法，此方法的特点是水解彻底，但色氨酸遭破坏。（6N HCL、110℃真空水解24小时） 优点：HCL本身加热可以蒸发除掉。缺点：溶液显黒褐色、与含醛基化合物作用的结果。 2、碱水解法：用NaOH(LiOH、Ba(OH)2)作