低分子肝素钙的创新工艺研究1.docVIP

低分子肝素钙的创新工艺研究 朱晓云，徐璟，刘海青* （海南大学海洋学院制药工程系，海南 海口，570228） 摘要:本论文考察制备平均分子质量在4000～8000间的低分子肝素钙的优化条件，并测定肝素钙制剂效价。方法：以市售注射用肝素钠为原料,经过亚硝酸钠降解成低分子肝素钠,树脂脱钠,氧化钙中和转型成钙盐,最后用乙醇沉淀析出。羊血浆法测定肝素钙制剂效价。结果：最佳条件:降解的pH值为2.8 ,亚硝酸钠的浓度为0.285 mol/L ,氧化钙中和反应后,氧化钙加入的浓度为8.0 mol/L 。结论:该条件下制备的低分子肝素钙符合质量标准。 关键词：低分子肝素钙；羊血浆；效价测定 作为近年来发展起来的新一代肝素类抗血栓药物，低分子肝素钠可以克服肝素钠的一些副作用，成为抗血栓的首选药物。目前我国低分子肝素钠用药已占肝素类80%以上，年增长率在30-40%之间。这使得低分子肝素钠的需求日益增加，目前的生产量难以满足人们的需求。 目前，国内很多药厂购进低分子肝素钠精品生产低分子肝素钙，但由于原料价格急速上涨，导致该产品面临停产，本论文探索精品大分子肝素钠为原料制备低分子肝素钠进一步制备低分子肝素钙，从而降低生产成本，为药厂产生了良好的经济效益。LMWH的制备方法有多种，不同制备方法所得的生物功能也不完全相同。目前国内外制备LMWH的方法一般有：亚硝酸降解法、肝素酶降解法、过氧化物降解法、消除降解法以及高碘酸降解法和物理分离降解法等。理想的LMWH的结构应与UHF一样。现阶段国内比较普遍的是采用亚硝酸降解法。本文采用亚硝酸降解法，并对具体的影响因素进行了摸索。 1 材料与方法 1.1 实验材料 紫外分光光度计(Ult rospec2000)(Pharma2cia)，离心机(Sigma 3K30)，精密pH计(Beckman)，磁力搅拌器(Ikamagret)，精密电子天平(Sartorius)。精品肝素(市购)，其它试剂均为分析纯 1.2 实验方法与步骤: 1.2.1 低分子肝素钙的工厂原制备工艺 向精品低分子肝素钠溶液加入已预处理过的732阳离子树脂,直至pH值恒定在1.0，过滤得滤液。加入氧化钙粉末至全部溶解，pH为7.0时，搅拌下加入氯化钙粉末全部溶解，放置4℃冰箱过夜。过滤，向滤液中缓慢加入乙醇(体积比2∶1) ，离心,收集沉淀,用适量乙醇、丙酮洗涤，脱水，60℃下真空干燥4 h 。得到低分子肝素钙。 1.2.2 低分子肝素钙的的改进制备工艺 1.2.2.1 低分子肝素钠的制备工艺 一般将精品大分子肝素钠原料溶于1%醋酸溶液中,加入一定量的亚硝酸钠溶液,控制pH值在2.3～4.0范围内，一定温度下搅拌反应1～4h。用5mol/ L氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.0，并加入反应液2.5倍体积的无水乙醇沉淀，于4℃左右放置12～16h，去上清液，沉淀中加入2～3倍体积丙酮脱水研磨2～3次，经过超滤浓缩,乙醇沉淀，丙酮脱水干燥得白色LMWH精品。 本实验综合文献资料及工厂生产实际需要，确定其他因素不变，对主要影响效价的因素PH值摸索其最佳条件。 1.2.2.2 低分子肝素钙的制备工艺 脱钠[4] 按文献,在搅拌下向“1.2.2.1”条件所得液中加入已预处理过的732阳离子树脂,直至pH值恒定在1.0，过滤得滤液。 钙盐的中和制备[4] 冰浴条件下向“脱钠”条件所得滤液中加入氧化钙粉末至全部溶解，pH为7.0时，搅拌下加入氯化钙粉末全部溶解，放置4℃冰箱过夜。过滤，向滤液中缓慢加入乙醇(体积比2∶1)，离心，收集沉淀,用适量乙醇、丙酮洗涤，脱水，60℃下真空干燥4 h 。得到低分子肝素钙。 1.2.3 羊血浆法测定肝素钠效价 肝素钠系自猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，具有延长血凝时间的作用，其效价测定方法《中国药典》为兔血浆法，《美国药典》为羊血浆法，本实验运用羊血浆法[5]对肝素钠进行了效价测定。其原理是在加有标准品和供试品肝素钠的羊血浆重钙化一定时间，观察标准品和供试品肝素钠加人管的凝固度，如标准品和供试品配成相同浓度而又得到相同凝固度，则说明它们的效价也相同，如此来对比测定未知样品的效价[6]。 1.2.3.1 标准品溶液的配制 精密称取肝素钠国家标准品（批号：150509-200912 效价197IU/mg）适量，用生理盐水配成每毫升含100个单位的溶液，分装熔封于2ml安中置冰箱内贮存。 1.2.3.2 羊血浆的检验 肝素钠的效价测定, 全国各生化药厂对出口产品大都用羊血浆法。此法操作方便、计算简捷，其测定结果与兔全血法十分接近。美国药典一直采用此法为肝素钠效价的法定方法。在此法测定中，关键是羊血浆的制备。