1-溴丙烷吸入染毒对Wistar大鼠睾丸毒性研究.doc

1-溴丙烷吸入染毒对Wistar大鼠睾丸毒性研究 摘要:目的探讨1-溴丙烷吸入染毒对Wistar大鼠睾丸结构及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。方法无特定病原体级健康雄性Wistar大鼠24只随机分为对照组和染毒组，分别给予质量浓　　度为0.0和5000.0mg/m3的1-BP连续动式吸入染毒，每天染毒8h，每周5d，共4周。染毒结束后处死大鼠，分　　离各脏器并计算各脏器系数，固定睾丸行病理组织学检查，采用病理切片扫描仪扫描睾丸切片，定量分析睾丸曲细　　精管平均直径及含精子的曲细精管比例，采用免疫组织化学法检测睾丸内Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果染毒组大鼠体质量于染毒第1～4周均低于同时间点的对照组(P0.01)。染毒结束后，染毒组大鼠睾丸、心脏和肾脏的质量均低于对照组(2.80±0.62)vs(3.28±0.40)g，(0.97±0.13)vs(1.16±0.21)g，(2.07±0.29)vs(2.31±0.26)g，P0.05]，肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的脏器系数均高于对照组[(0.51±0.06)%vs(0.44±0.05)%，(4.36±0.62)%vs(3.74±0.39)%，(0.81±0.07)%vs(0.72±0.06)%，(0.23±0.03)%vs(0.20±0.02)%，P0.05]，但染毒组大鼠睾丸脏器系数与对照组差异无统计学意义[(1.10±0.23)%vs(1.03±　　0.11)%，P0.05]。染毒组大鼠睾丸大部分曲细精管结构正常，个别曲细精管内可见明显的形态学改变;染毒组大鼠睾丸曲细精管平均直径与对照组差异无统计学意义[(279.88±15.49)vs(285.41±12.69)μm，P0.05];染毒组大鼠睾丸内含精子曲细精管比例低于对照组[(42.00±10.79)%vs(56.05±12.72)%，P0.01];染毒组大鼠睾丸内Bax蛋白表达较对照组增强(P0.05)，但Bcl-2蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论1-BP吸入染毒可致雄性Wistar大鼠睾丸损伤，睾丸中Bax蛋白表达增强可能在其睾丸毒性作用机制中发挥作用。关键词:1-溴丙烷;睾丸;吸入染毒;数字切片;曲细精管;B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2);Bcl-2相关X蛋白;大鼠中图分类号:R135文献标识码:A文章编2095-2619(2015)03-0268-06 1-溴丙烷(1-Bromopropane，1-BP)，又称正丙基溴或溴代正丙烷，是一种无色透明、有刺激性气味的液体，由于其不会对大气臭氧层造成破坏，常被作为氟利昂、氯乙烷、四氯化碳和三氯乙烯等消耗臭氧层物质有机溶剂的替代品，广泛应用于电子、精密仪器和服装干洗等行业中[1-2]。研究表明，1-BP吸入暴露可导致神经、肝脏、血液等系统毒性和免疫毒性[3-6]。亦有研究报道1-BP腹腔注射染毒可导致生殖毒性[7]。鉴于职业接触人群在职业活动中主要是通过呼吸道接触1-BP，本研究通过建立1-BP吸入染毒动物模型，观察1-BP对雄性Wistar大鼠睾丸的毒性作用，并对其作用机制进行初步探讨，以期为我国的1-BP职业病防治工作提供研究数据。 1材料和方法 1.1动物无特定病原体(SPF)级健康雄性Wistar大鼠[南方医科大学动物实验中心，实验动物生产许　　可证号:SCXK(粤)2011-0015;实验动物使用许可证号:SYXK(粤)2014-0048]24只，6～8周龄，体质量　　180～220g。动物饲养于屏障设施，饲养条件符合GB14925—2010《实验动物环境及设施》的有关要求，温度为22～26℃，相对湿度为40%～70%，实验期间动物自由摄食和饮水。本研究经广东省职业病防治院实验动物伦理委员会审查及批准。　　 1.2仪器和试剂L-RD/0300B型动式吸入染毒柜(广州九方公司);LFS-113型低流量空气采样泵(美国　　Gilian公司);GH-1型活性炭采样管(中国江苏恒丰仪器制造有限公司);Agilent6890气相色谱仪(美国　　Agilent公司);ExcelSior全自动组织脱水机(美国Thermo公司);AP280XZ组合式石蜡包埋机、HM360全自动石蜡切片机(德国Microm公司);病理切片扫描仪(匈牙利3DHISTECH公司);Scope.A1光学显微镜(德国ZEISS公司)。1-BP(纯度为99.81%，山东默瑞有限公司);甲醛、戊巴比妥钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硝酸(分析纯，广州化学试剂厂);磷酸盐缓冲溶液(PBS)、苏木素-伊红(HE)染色液(广州维格斯生物科技有限公司);pH值为8.0乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修复液、质量分数为3.0%的过氧化氢阻断内源性过氧化物酶(英