2016紫外-可见吸收光谱与荧光光谱.ppt

利用同步荧光光谱分离色氨酸1、酪氨酸2和苯丙氨酸3的重叠荧光峰 一般荧光光谱 同步荧光光谱 (波长差70nm) 张悦等. 食品科学, 2010,31(16): 204-207 */86 Xiao Y, et al. Nano Letter, 2011,11: 1122-1126 纳米线荧光的测量 */86 课堂练习 1．氧气在760 nm附近的吸收截面约为10-27 cm2，假设在一个光程为1 m的气体容器中充入氧气，测得吸光度为0.1，试问容器中单位体积内有多少个氧气分子？ 2. 化合物C2H4与CH2=CH-CH=CH2在紫外光谱上有什么差别？为什么？ 3．下列化合物中，荧光信号显著的化合物是( ) 4．荧光分光光度计中激发光方向与检测器方向呈 角度，这是因为 。 5．荧光光谱的形状与激发波长有关。选择最大激发波长，可以得到最佳荧光信号。（ ） 6．发荧光时，电子能量的转移没有电子自旋的改变；发磷光时，电子能量的转移伴随电子自旋的改变。（ ） */86 * * * * Theoretically, STED is to introduce a donut-shaped laser, noted as the depletion beam, into the laser scanning confocal scheme. The depletion beam quenches the fluorophores in the periphery of the excitation spot by stimulated emission, and only fluorescence emitted from the sub-diffraction center can be recorded. Thus, we can get a PSF with sub-diffraction size. * (2) 光度标定 重铬酸钾标准溶液：0.0303克重铬酸钾溶于1升浓度为0.05 mol/l的氢氧化钾 1cm 样品池，25°C，测定吸收光谱 */86 (3) 杂散光标定 一般选择透射率为0的波长处进行杂散光定标 NaI标准溶液——240 nm 纯丙酮——310 nm */86 更多的荧光探测技术 三维荧光光谱 激发波长+发射波长+荧光强度，完整地描述了物质的荧光特征 总发光光谱、等高线谱、激发-发射矩阵、全扫描荧光光谱 在每个激发波长下测量荧光光谱 */86 三维图 等高线图 */86 同步荧光光谱技术 在同时扫描激发单色器和发射单色器波长的情况下测量荧光光强，由测得的荧光强度对发射或激发波长作图 两种同步扫描形式——固定波长和固定能量（波长或能量间隔的选择很重要，选择恰好等于某吸收带和发射带波长间距） 固定波长：激发波长与发射波长间隔固定（沿三维谱的45度方向就可得到固定波长的同步荧光光谱） 固定能量：激发光波光子能量与发射光波光子能量差固定 特点： 与激发光谱及发射光谱都有关系，能使选择性进一步改善 能够增强强带而减小弱带的干扰 它可以消除瑞利散射信号的干扰，也能够使拉曼强度降低，但同时会把拉曼吸收峰拉宽 */86 丁省(4个苯环)的同步荧光光谱 */86 激光诱导荧光光谱技术 使用激光代替普通光源激发荧光 具有如下特点： 信噪比更好，灵敏度更高：激光强度大，方向性好（对荧光干扰小），谱线窄（容易用滤波器滤除） 选择性高：只有与分子能级间隔相匹配的激光才能被吸收而激发出荧光 适合于微区分析：激光光束可以聚焦成很小的光斑 其它：可调谐激光器可省去激发单色仪 */86 计算机 电子电路 光电探测器 激光 聚焦透镜 物镜 滤光片 样品 斜射式检测系统 */86 共聚焦检测系统 针孔和样品上检测点分别出于光路两个共轭焦点上，这样检测点处产生的荧光才能通过针孔。 可以有效地提高信噪比！ 计算机 电子电路 光电探测器 激光 二向色镜 聚焦透镜 滤光片 样品 针孔 主物镜 */86 时间分辨荧光光谱技术 物质在光激发下，荧光强度会随时间而变化，可测量荧光寿命 如何测量荧光强度随时间的变化？（荧光衰减是个快瞬变过程） 脉冲取样技术，时间相关单光子计数法，相移法 */86 脉冲激光器 样品池 光电倍增管 分光镜 聚光镜 单色器 高速光敏二极管 取样 积分器 取样触发信号 电源 电源 记录器 脉冲取样积分技术 */86 时间相关单光子计数 脉冲激光器 样品池 光电倍增管B 分光镜 聚光镜 单色器 光电 倍增管A 电源 电源 电压甄别器A 电压甄别器B 可调延迟装置 时幅 转换器 多道 分析仪 记录仪 启动 停止 */86