2.17病理切片技术.ppt

石蜡切片 以石蜡制作的切片，可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米，而石蜡切片不但可以达到这个要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。另外，石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片，而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存，所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中最普遍常用的一种方法。 切片机 切片机的基本类型有五种，按其结构叫做： （1）摇动式切片机，（2）轮转式切片机，（3）滑动式切片机，（4）推动式（雪橇式）切片机，（5）冰冻切片机。 最常用的是轮转式切片机。 切片机 切片机 轮转式切片机：系借转动手摇轮进行切片动作。是靠旋转一个重轮，带动螺纹轴或齿轮，将组织块夹具向前推进，并在上下平面摆动；推动的距离靠一个有刻度的调节器控制，每一梯度为1或2微米。 切片前的准备 恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。 将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。 准备好载玻片、小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。 切片的步骤 将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。 再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。 根据需要调整切片厚度。 摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。 切片的步骤 实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。 切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。 将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中（光亮的一面朝下），立即用毛笔轻轻拉展，以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开，注意不可拨破组织。然后分开每张切片，选取其中最完整的，没有皱褶的切片。 贴片（捞片） 待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中，以做过防脱处理的一面轻靠切片，将玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份时用毛笔，拨正切片位置。如组织较小，可在玻片上多贴几片或几排，但排列应密集、整齐。 烤片 用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。 将附贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2-8小时，使切片牢固地贴附于载玻片上即可进行染色。 切片的注意事项 切片质量的好坏，除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外，切片刀是决定的因素，刀一定要磨得十分锋利。否则在切片时会自行卷起或皱起，或将组织划伤出现刀痕，更不能顺利地将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺口存在，将使制成的切片断裂、破碎，不完整，切片时应时时擦净刀口。 切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。在切制切片的开头阶段如出现切制不良与其他故障，最常见的原因是蜡块或切片刀的松动所致。 摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则可因用力过重而使机身震动，造成切片厚薄不均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时，应该轻轻切削，以防组织由于震动形成空洞现象。 在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，这样不仅可保持石蜡的硬度，同时也减少了切片的褶皱，给切片制作带来方便。 冰冻切片 冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。 主要应用于： 用于有些水解酶如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等的定位的组织化学方法以及免疫组织化学方法等。 用于证明脂肪及类脂和神经组织髓鞘的染色时的切片，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。 用于临床手术的快速病理诊断。 神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。 对某些物质所进行的免疫荧光的研究。 德国莱卡恒温箱冷冻切片机 冷冻切片机工作原理 这并非特殊类型的切片机，只不过组织块承托台改换成急速冷冻（约零下20～30℃）装置。这种急速冷冻装置可以有两种形式：一为通过液体CO2，在液体CO2蒸发时，急速吸收大量热而使组织块很快冷冻。另一种为半导体致冷装置，借半导体元件电偶作用急速使组织承托台降温，在１～2分钟内也能达到组织冻结的目的。 须注意的是，制作冰冻切片时，不但要使组织块冷冻，同时还应是切片刀冷冻（如利用喷散的多余液体CO2或半导体致冷装置使刀降温）。 这两种冷冻装置以半导体冷冻装置使用方便，但需电源和水源。 冷冻切片机 该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进行工作状态。启动即时除霜键，可将工作间顶