藻蓝蛋白实验设计MicrosoftOfficePowerPoint演示文稿题库.pptVIP

内蒙古科技大学 Inner Mongolia University Of Science Technology 内蒙古自治区生物质能源化利用重点实验室 内蒙古科技大学 生物工程与技术研究所 Inner Mongolia Key Laboratory of Biomass-Energy Conversion Institute of Bioengineering and Technology, IMUST 螺旋藻藻蓝蛋白提取 李红霞 螺旋藻:蓝藻门、蓝藻纲、段殖藻属、颤藻科、螺旋藻属 螺旋藻7个最 螺旋藻在提高免疫、抗辐射、修复细胞、抑制肿瘤等方面有着卓越的功效 1 优质蛋白质 约含60%-70%，大豆40%，奶粉13%-22%，瘦肉为16%-22%。 2 藻多糖 （抗辐射的有效物质）2%-6%，为螺旋藻特有物质。 3 β-胡萝卜素 （可转化为维生素A）含量是胡萝卜的15倍，在至今发现的天然食物中含量最高 4 育粉（维生素E） 含量在植物里最高 5 维生素B12 含量在植物中最高 6 藻蓝蛋白 （防止癌症）含量高达17%，是植物中之最 SOD（超氧化物歧化酶） 含量达2万-6万单位 蛋白质 作用 生物体组成成分、酶、运输、运动、抗体、干扰素、遗传信息的控制等。 结构 ①氨基酸残基排列顺序②α-螺旋、β-折叠、 β-转角、自由回旋、超二级结构和结构域③三级结构④四级结构 性质 ①两性电离和等电点②胶体性质③沉淀反应（高浓度盐类、有机溶剂、重金属盐、酸类）④颜色反应（双缩脲、米伦氏、乙醛酸、坂口、福林试剂） 蛋白质研究的实验设计 藻液 细胞破碎 蛋白质抽提 蛋白质粗分离 蛋白质纯化 目的蛋白质鉴定 蛋白质纯品 结构研究 纯品鉴定 功能研究 性质研究 相对分子质量 等电点测定 特殊氨基酸测定 一级结构 高级结构 蛋白质含量 结构和功能关系 蛋白质的分离 （双向电泳） 蛋白质的鉴定 （质谱法） 蛋白质表达模式 功能模式研究 蛋白质组数据库 （生物信息学分析） 理论意义和研究价值 蛋白质组学研究 纯化 性质结构功能研究与应用 提取分离 细胞破碎 机械法 研磨、匀浆 物理法 温度、压力、渗透法、超声波（压榨法、超声波法、冻融法、低渗裂解法） 化学法 有机溶剂法、表面活性剂法 酶解法 蛋白质的抽提 抽提液 大部分蛋白质都溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂质结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮、丁酮等有机溶剂 注意事项 1 温度低 2 等电点两侧 3加入离子强度低的中性溶液 4还原剂 5原材料的1-5倍 蛋白质含量的测定 物理性质 可见光-紫外线吸收 折射率 比重 化学性质 1 测定含氮量(凯氏定氮法） 2 呈色比色法（双缩脲反应、Folin-酚试剂） 蛋白质 分离纯化 分子大小 透析 超滤 凝胶过滤层析 溶解度 盐析 有机溶剂沉淀 等电点沉淀 选择性沉淀 带电荷不同 PAGE 毛细管电泳 等点聚焦 离子交换层析 层析聚焦 吸附力强弱 羟基磷灰石柱层析 疏水作用层析 其它方法 亲和层析 高效液相色谱法 微量结晶法 蛋白质纯度鉴定 等电聚焦 毛细管电泳 等电聚焦 离子交换层析 层析聚焦 蛋白质化学性质研究 1 相对分子质量测定： SDS-PAEG 超速离心法 凝胶过滤法 渗透压法 化学组成测定 毛细管电泳法 质谱法 2 蛋白质等电点测定： PAEG等电聚焦 毛细管电泳法 3 目的蛋白质的鉴定： DSD-ＰＡＧＥ 蛋白印迹 酶联蛋白吸附法 免疫共沉淀 高效液相色谱法 质谱法 一级结构 化学分析法（即蛋白质一级结构的序列分析) 推导法（通过测定编码蛋白质的氨基酸序列来推测相应蛋白质的氨基酸序列） 空间结构 圆二色法 X-射线法 磁共振法 荧光光谱法 蛋白质结构预测（生物信息学方法：从蛋白质的氨基酸序列来预测其三维空间结构） 蛋白质结构分析 蛋白质功能研究 蛋白质的化学修饰：侧链基团+主链结构 结构的改变使其生物活性的改变。 蛋白质侧链基团的化学修饰主要可通过选择性试剂或亲和标记试剂与蛋白质分子侧链上特定功能基团发生化学反应来实现。 研究目的 实用价值高 工业化生产受阻 化学结构需解决 生理机制不明确