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实验十七尿液淀粉酶活力测定（winslow）氏法
实验目的： 掌握酶活力测定的一般思路与方法； 尿液淀粉酶活力测定 （Winslow）氏法 原理： 临床上通常用Winslow氏法测定尿或血清中淀粉酶活性。该法对淀粉酶活性单位的规定是：在37℃，30分钟，恰好能将0.1%淀粉溶液1m1水解（指加入碘液后不再呈兰色）的酶量定为一个活力单位。 试剂与器材： 1.0.9%NaC1； 2.0.1%淀粉； 3.0.3%碘溶液; 4.移液管； 5.试管； 6.恒温水溶锅。 操作： 1.留取尿液（中段尿） 2.取10支试管，按次序记上号码，各加0.9% NaCl 1 m1。 3.用1m1移液管加尿液1m1于第一管，使其与0.9%NaC1混合。用移液管吸取，然后任其流出。反复三次，使全管混匀。 4.从第一管吸出1m1到第二管中，混匀。吸出1m1到第三管……依次类推。到第九管混匀后, 吸出1m1弃之。这样即可获得分别含有尿液1/2、1/4、1/8……1/512m1的不同浓度的尿稀释液，第10管不加尿液作为对照管。 5.从第10管起依次迅速准确加入0.1%淀粉液2m1。迅速摇匀。置37℃，保温30分钟 。 6.保温30分钟后，取出各管。向各管中加稀碘液1-2滴摇匀。观察各管的颜色。各试管中出现黄到蓝的色序。黄色表明无淀粉存在，浅红色到紫色表明有淀粉的水解中间产物。蓝色表明有淀粉或其初期水解产物存在。 计算：从10号管开始向1号管仔细观察溶液颜色, 选择恰好蓝色消失的一管中的尿液含量来计算酶活性。假设第5管恰好蓝色消失。已知第5管内含尿液为1/32m1。即1/32m1尿液能在37℃，30分钟水解0.1%淀粉2m1。所以，1 m1尿液在同样条件下可水解0.1%淀粉64 m1。即每1m1尿液中所含淀粉酶的活性为64个活力单位。 【参考值】 （尿）8~64单位；（血清）4~32单位。 【注意事项】 1.试管干净。吸管专管专用。 2.尿液留取中段尿，结果准确。 3.判断试管颜色时要与第十管比较。 【临床意义】 胰腺炎、腮腺炎、胆道疾病时尿淀粉酶活性增高。 血清及尿淀粉酶来自胰腺和唾液腺的分泌。在正常情况下，大部分淀粉酶随消化液进入消化道，少量可进入血液循环。引起血清淀粉酶活性增高有三个方面的原因： ① 胰腺组织的炎症损伤使酶释放增加； ② 分泌过多； ③ 胰腺等组织排泄受阻。 由于淀粉酶分子量较小，易通过肾小球从尿排出，所以，血清淀粉酶活性增高也反应在尿中。由此可知，血和尿淀粉酶检查主要用于诊断胰腺炎。 【思考题】 1.第5步为什么从第十管起依次向各管迅速准确加入0.1%淀粉溶液2ml？ 2.第十管为什么不加尿样？
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