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????????????????????果蝇唾液腺染色体的制片与观察?邓晓娟 、实验目的?1、练习果蝇唾液腺的分离方法?2、掌握唾液腺染色体的制片技术?3、观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征?二、?实验原理?1、双翅目昆虫（果蝇）幼虫期的唾液腺细胞很大，其中的染色体称唾液腺染色体，相当于一般普通染色体的100－150倍，又称巨大染色体。?2、在幼虫发育过程中，唾液腺染色体仍进行复制，但细胞只生长不分裂，从而产生多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅不一、宽窄不同的横纹，这些横纹的数目和位置是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。如果染色体缺失、重复、倒位、易位等结构变异时，很容易在唾腺染色体上识别出来。3、多线染色体的特征：a?巨大；b体细胞配对，所以染色体只有半数（n=4）；c?各染色体的异染色质多份额着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；d?横纹有深浅、疏密的不同，各自相应排列，这意味着基因的排列。?三、实验材料和用品?实验材料：黑腹果蝇的三龄幼虫?实验用品：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸。生理盐水、?1％醋酸洋红。?四、实验步骤?取唾液腺：?(1)挑取三龄幼虫。用解剖针从培养瓶中挑取行动迟缓、爬上管壁但未蛹化的肥大幼虫，体长约5mm。个体肥大的幼虫是制作唾腺染色体的基础。?(2)区分幼虫的头部。虫体尖细的一端为头部，有呈黑色的口器。另外，果蝇的头部引领身体一伸一缩向前挪动。?(3)拉取并剥离唾腺。左右两手各执一根解剖针，分别扎住幼虫的头、尾的1／3处，右手迅速向左拉开。在显微镜下找出唾腺，并用解剖针把周围不需要的组织拖离唾腺，用吸水纸擦去，尽可能剥离附着在唾腺上的脂肪组织，然后滴一滴生理盐水于载玻片上?（4）、加一滴1mol/l,室温下水解2min,把多余的盐酸吸干。（5）、滴一滴苯酚品红在载玻片上。?染色3?分钟，盖上盖玻片，用滤纸轻压一下吸去多余的染色液，然后平放在桌子上，用大拇指适当均匀用力压住，并横向揉几次（勿使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉！）。?（6）、?显微镜观察，先在低倍镜下观察，找到分散好的染色体图像，再高倍镜观察。五、实验结果（一）、唾液腺图1 果蝇幼虫唾腺（含消化道前端）体视显微图（4×10）如图我们可以看出唾液腺呈半透明状，球棒状，前端较细，后端粗钝，有时成对黏在一起成“V”字形，其外侧有乳白色的脂肪、肠管也是半透明的（二）、果蝇唾液腺染色体之前由于压力不够，有的染色体无法分开，有的分开较明显（A）用力适当，染色体分开良好，但压片未能排除气泡（B）图2 果蝇幼虫唾腺染色体显微图像（10×40）清楚地看到染色中心向四周放射状地伸出5长1短的6条臂（C）图2 果蝇幼虫唾腺染色体显微图像（10×40）本次实验结果中染色体臂较为舒展，染色中心明显。不足在于图2 A中染色体臂末端有所缠，未能完全分开，图2 B中的标本染色较浅，又限于放大倍数原因，未能对染色臂末端胀泡结构进行观察与辨认。图二C中染色结果较理想。六、注意事项?注意补加生理盐水，剥离出唾腺后及时将玻片移出体视镜灯光，否则唾腺及盐酸、染液易干。同时水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。??剥离标本后如生理盐水多了，可将玻片略倾斜令液滴缓慢流至边缘吸去，使标本附着在玻片中心，以防将唾腺一起吸走。??染色液勿过多，否则压片时唾腺易随染色液漂走。如染色时间到后，染色液量少，应再加少许染色液，再盖上盖波片，避免气泡产生。??压片时要均匀单向用力，避免盖玻片移动。七、讨论1.?要想顺利地找出唾腺就要抓住以下特征：?①位置，在幼虫体前约1／3处；②形状，一堆囊状结构，上小下大，常附着不透明的带状脂肪；③染色，半透明，比周围组织都透明，略带白色；④细胞特征，唾腺上的细胞较大，轮廓清晰。2.果蝇唾腺染色体特点：?巨大；?核内有丝分裂：果蝇幼虫的唾腺细胞在发育过程中，细胞核内的DNA多次复制，但并未发生细胞核分裂，复制后的子染色体彼此不分开，形成了多线染色体。?体细胞配对：同源染色体相互靠拢在一起呈现一种联会状态，使其比一般的体细胞染色体粗大。?横纹结构：染色质丝的不同部位螺旋化程度不同。其中螺旋化程度较高的形成染色较深的暗纹，螺旋化程度较低的部位形成了染色较浅的明纹。横纹数量巨大，在黑腹果蝇中可达5000多条。这些深浅不一，疏密各异的带纹遍布整条唾腺染色体。?3.果蝇唾腺染色体的作用：?唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。?唾腺染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。??唾腺染色体的带纹与某些特定的基因相联系。某染色体上出现的变异，在唾腺染色体相应的臂上就