酶工程-基本原理1课件.pptVIP

CH 1.2 酶工程及其主要研究内容 1 生物工程（Biotechnology）：又叫生物工艺学，是20世纪70年代开始提出的一个高新技术名词，是指以遗传工程技术为先导的将生物技术与化学工艺、工程相结合并产业化应用的技术领域。包括四大分支领域：遗传工程、细胞工程、发酵工程和酶工程。 2 酶工程（Enzyme Engineering）：是酶学研究与其应用工程结合形成的一门新的技术领域；是酶学、微生物学的基本原理与化学工程技术有机结合、相互渗透形成的边缘学科。 包括上游工程和下游工程：前者包括酶的产生和酶制剂制备；后者主要包括酶固定化技术、酶修饰技术和生物反应器。 （1）上游技术： （2）下游技术： CH 1.3 酶的历史沿革1 酶学研究简史 [1] 酶的发现: 尽管我国早在4000多年前就朴素地应用了酶, 但真正对酶的认识还是1833年Payen 和 Person 首先从酒精发酵物中提取到一种活性物质, 发现能够促进淀粉分解(发现了淀粉酶); [2] 酶(Enzyme)的提出: 继Payen 和Person之后, 德国的Kuhne进一步深入研究了酶,并提出Enzyme这个名词; enzyme 是希腊文,原意是指“在酵母中” 我们翻译成酶, 日本译成酵素. [3] 酶学(Enzymology)奠基:在Kuhne 之后, Buchner兄弟从事了从破碎酵母细胞提取酶的研究, 获得了能转化糖产生乙醇的粗酶. 此后便开始了从酶的提取、酶的性质、酶催化反应等开始了酶的研究。形成了初步的新兴学科。 CH 1.3 酶的历史沿革2 酶工程的发展历程 [1] 酶工程研究的奠基：以工业化酶制剂生产为主要内容的酶工程雏形阶段（50年代）； [2] 酶固定化技术和细胞固定化技术研究始于60年代； [3] 70年代基因工程崛起，将酶工程技术研究引向深入并赋予了新的内涵； [4] 1971年第一次国际酶工程会议的召开，标志了酶工程学科和完善的技术体系的形成； [5] 80年代实现了克隆酶的突破；（Wager将青霉素酰化酶基因克隆到Ecoli菌株 质粒上，获得了高效表达） [6] 80年代形成了酶固定化技术、细胞固定化技术研究等酶工程的研究热点，并广泛产业化应用. 开始了转基因技术和酶化学修饰技术； [7] 90年代形成了以遗传工程为先导的酶工程技术分支——生物酶工程（包括酶基因克隆表达和基因修饰） 锁 钥 学 说 诱导契合学说 酶催化机理实例—胰凝乳蛋白酶 ★丝氨酸蛋白酶家族具有类似的Ser -His-Asp催化三联体（电荷中继网）。 电荷中继网： Ser195—His57—Asp102氢键体系。通过电荷中继网进行酸碱催化及共价催化。 没有底物时， Ser195—His57—Asp102形成一个氢键体系，His57是去质子化状态， Asp102的COO-通过氢键定位并固定His57。 结合底物时： His57从Ser195接受一个质子，增加了Ser195羟基氧原子对底物的亲核攻击性， Asp102的COO-稳定过度态中His57的正电荷形式。 ★ ? 胰凝乳蛋白酶反应的详细机制 ?第一阶段： 酰化 Ser195---OH 中的氧攻击肽键的羰基碳（共价催化），酶的His57咪唑H+与底物中的-NH形成氢键（酸碱催化），形成四联体过渡态（Ser195—O-、底物的羰基C、底物的-NH、His的咪唑H+ ），肽键断裂，氨基产物释放，底物的羧基部分酯化到Ser195的羟基上。 第二阶段： 脱酰 电荷中继网从水中吸收一个质子，结果产生的OH-攻击连在Ser195上底物的羰基C原子，形成四联体过渡态，然后His57供出一个质子给Ser195上的氧原子，底物中的酸成分从Ser195上释放。 酶催化机理实例—胰凝乳蛋白酶 1.胰凝乳蛋白酶结构 酶催化机理实例—胰凝乳蛋白酶 酶催化机理实例—胰凝乳蛋白酶 CH2.2 酶催化反应的动力学5 Lineweaver-Burk双倒数方程及Km的测定 将米氏方程取倒数可得以下方程: Km 1 1/V= . +1/Vmax Vmax [S] 利用此方程作图即可计算出酶的Km和Vmax。 在设计测定以上参数的试验时，需注意[S]的取值范围，一般应该在Km值两侧设定[S]值，经验数值是0.33-2.0Km范围为宜。 影响酶促反应的因素 一.底物浓度[S] 1.酶促反应速度V与底物浓度[S]的关系 影响酶促反应的因素 二.酶浓度 [E] 影响酶促反