4催化反应动力学-3多底物.ppt

第四章 酶催化反应动力学 第一节 单底物反应动力学 第二节 抑制作用动力学 第三节 多底物反应动力学 第四节 别构酶动力学 第五节 pH和温度对酶催化反应速度的影响 一、酶促反应分类 二、多底物的命名、表示方法 以双底物双产物例: （1）底物按与酶结合次序分A、B、C、D； （2）产物按脱离次序分P、Q、R、S； （3）抑制剂I； （4）中间产物分稳态和过渡态（非/中心过渡态）； 稳态:酶与底物共价结合,可与另一底物发生双分子反应; 过渡态:(1)酶活中心未完全占据;(2)酶活中心已完全占据. （5）稳态中间物用E、F、G表示，过渡态用EA、EB、EAB表示，通常只假定存在着一种中心过渡态中间物（EA EP）表示其异构化 Cleland命名和表示方法 （6）单（Uni),双（Bi),三（Tri),四（Quad)等表示 如，BiBi:双底物双产物；UniBi:单底物双产物。 按反应动力学分： 有序：指所有底物与酶结合必须在任何产物释放之前！ （1）序列有序：酶与底物结合严格按一定顺序进行； （2）序列随机：底物与酶结合顺序随意； 乒乓：一部分底物与酶结合后即释放一部分产物再结合另一部分底物再释放一部分产物！ （7）酶促反应历程用直线表示（除随机） （8）随机机制用菱形表示； （9）Km表示米氏常数，Ki表示抑制常数。 （二）多底物反应动力学分类 本节主要讨论BiBi反应； 按反应方式历程(是否形成三元络合物)分为两大类:（序列与乒乓） 说明 （1）中心过渡态EAB可转变为EPQ，也可直接分解为产物，或此中间物有一系列推导出的方程一样； （2）若酶本身发生异构化，则为异型序列BiBi，推导出的方程与（1）有所不同; （3）特殊序列有序机制：EAB形成很慢分解极快在动力学上可忽略。为Theorell-Chance机制 2、反应过程不形成三元络合物 即乒乓机制； 双置换反应(double-displacement reactions)； 特征:酶E与底物A生成复合体，产物P的脱离在另一底物B加入之前。 三、双底物反应恒态动力学 对特定反应历程要得到其稳态动力学一般步骤: (1)写出反应历程的方程式 (2)再写出包含各种酶形式的微分方程,建立稳态后各种酶存在的形式浓度变化可做等于0 (3)根据质量守恒条件去寻找各种酶存在形式的浓度代数解,最终得到酶促反应的速度方程 1956年King和Altman在矩阵理论基础上提出了一个简便方法后经Wong和Hanes加以规则化 封闭圈问题！ 当反应历程构成的基本图形不止一个封闭圈时,在写n-1 线图时,应把含有封团圈的图形扣除! 初速度方程 2.Alberty表达式 许多双底物酶促反应在固原定一个底物浓度而改变另一个底物浓度时服从米氏方程式； 对许多双底物酶促反应，在总酶浓度固定并远小于两个底物浓度时，Alberty根据K-A图形法推导出其方程一般形式为： 讨论 1、[B0]浓度很高时，简化为： 与米氏方程一样！水解酶类的酶促反应就如此； 2、[B0]固定但未饱和: 这也是米氏方程一种形式！ 3、序列有序机制时,混合常数为KASKBm,非KAmKBm; 4、序列随机机制中则都适用; 5、乒乓机制初速度内P极低,逆过程忽略,KAS=0,简化为: 双倒数图讨论 由上分析,当固定一底物浓度改变另一底物浓度时遵守米氏方程; 相应双倒数图为线性,分酶完全饱和和半饱和。 附1：Alberty方程系数求解（不饱和） 用二次作图法！ 1、先双倒数作图： 1/v~1/[A0],此时固定不同的[B0] 例：甘油脱氢酶催化甘油的反应是依赖NAD+的有序BiBi反应： 2、再分别以截矩对1/[B0]作图： ②乒乓机制推导 由于产物P浓度极低,逆过程可忽略, 式（I）中KsA=0 3.Dalziel表达式 Dalziel关于双底物的一般表达式： 动力学系数Φ求解 ①一次作图 原方程变换如下式： 固定不同[B0]， 作[E0]/v0~1/[A0] 得一系列直线： ②再二次作图： 分别用一次作图截矩、一次作图斜率对1/[B0]作图： 实例 甲醛脱氢酶FADH 催化甲酸转化为甲醛. 此反应为双底物酶促反应, 先固定B (甲酸) 的浓度, 以[E0]/V~1/[A ] 作图, 得到截距Y1 和斜率Y2; 在不同B 的浓度下可得到不同的Y1和Y2(图1A; 再以Y1~1/[ B ] 和Y2~1/[B ] 进行二次作图(图1B) , 即可求得Ф0,ФA,ФB,Ф AB。 Dalziel与Alberty比较 比较两方程双倒数形式, 有: vmax=[E0]/Ф, 得:[E0]= vmaxФ, 将其代入Dalziel方程双倒数形式中可得： 再与Alberty双倒数方程比较有： KAm=ФA/Ф