分子杂交的概念及基本原理分杂交的概念及基本原理分子杂交的概念及基本原理分子杂交的概念及基本原理.docVIP

分子杂交的概念及基本原理 主要内容：一、分子杂交的概念 二、分子杂交基本原理 （一）DNA变性： 1、DNA变性的方法2、增色效应3、溶解曲线4、融解温度5、影响Tm值的因素。 （二）复性：退火 一、分子杂交的概念：分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程。 利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。 二、分子杂交基本原理： （一）DNA变性： DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等）。 1、DNA变性的方法： 1)加热； 2)改变DNA溶液的pH； 3)有机溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素。 2、增色效应：DNA在260nm处有最大吸收值，这一特征是由于含有碱基的缘故。在DNA双螺旋结构模型中碱基藏于内侧，变性时由于双螺旋解开，于是碱基外露，260nm紫外吸收值因而增加，这一现象称为增色效应（hyperchromic effect）。利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化可追踪变性过程。 3、溶解曲线：如果升高温度使D