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子学习情境1天冬酰胺酶发酵 天冬酰胺酶(Asparaginase)是酰胺基水解酶，是从大肠杆菌菌体中提取分离 的酶类药物，其商品名Elspar，主要作为一种抗肿瘤药物，用于治疗白血病。 呈白色粉末状，无嗅，元味，微有吸湿性，易溶于水，不溶于丙酮、氯仿、 乙醚及甲醇等有机溶剂。20%水溶液室温贮存7d，5℃贮存14d均不减少酶的活力。干品5O℃、l5min酶活力降低30%，60℃、1h内失活。最适pH8.5，最适温度37℃。 天冬酰胺酶生产的工艺流程如下： 任务1菌种保藏 菌种保藏的目的 菌种是微生物学工作的重要研究对象和材料，也是工农业生产的宝贵资源。微生物菌种是使用、保存与管理是菌种培育工的一项重要工作。菌种是活的微生物，在菌种的使用保藏过程中需定期传代，并防止变异。菌种的保藏与传代是工作中的一项重要技术，因菌种管理不善，将会给生产带来重大影响。因此，采取相应措施保持菌种的存活率与优良遗传性状，防止菌种退化与污染或使已经退化的菌种恢复原有的性状。菌种保藏的目的就是为了防止优良遗传性状的丧失和菌种死亡。 二、菌种保藏的原理 菌种的保藏主要是依据微生物的生理、生化特性，人工创造条件使微生物代谢活动处于不活泼状态。利用微生物的孢子、芽孢及营养体，给以不适合其萌发、生长、繁殖的条件，即低温、干燥、缺氧、缺营养等手段来达到菌种保藏的目的。 水分对生物反应和一切生命活动至关重要，因此，干燥尤其是深度干燥，在菌种保藏中占有首要地位。高度真空可以达到驱氧和深度干燥的双重目的。 低温是菌种保藏中另一重要条件。微生物生长的温度低限约在-30℃。可是在水溶液中能进行酶促反应的温度低限则在-140℃左右。这就是为什么有水分的条件下，即使把微生物保藏在较低的温度下，还是难以较长期地保藏它们的一个主要原因。在低温保藏中，细胞体积较大者一般要比较小者对低温更为敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。其原因同低温会使细胞内的水分形成冰晶，从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤有关。如果放到低温下进行冷冻时，适当采取速冻的方法，可因产生的冰晶小而可减少对细胞的损伤。当从低温下移出并开始升温时，又会长大。故快速升温也可以减少对细胞的损伤。当然不同微生物的最适冷冻温度和升温速度也是不同的。如酵母菌的冷冻速冻以每分钟10℃为宜。 三、菌种的保藏方法 菌种的保藏方法很多。但任何一种方法都要求既能长期地保藏原有菌种的存活率、优良性状和纯度，同时又经济简便。一般每种菌株至少应采用两种不同的保藏方法，其中之一应 为真空冷冻干燥保藏或液氮保藏（减少遗传变异的最好方法）。在实际工作中要根据菌种本身的特性与具体条件而定。 （一）斜面保藏法 将各类微生物菌种接种在不同成分的斜面培养基上，待菌种生长丰满后置4℃左右冰箱中保藏，每隔一定时间进行移植新鲜斜面后继续保藏，如此连续不断，此法保藏简单，存菌率高，具有一定保藏效果，所以许多生产单位和研究机构对经常使用的微生物多采用此法保藏。具体操作步骤如下： 1、贴标签：将注有菌株名称和接种日期的标签贴在试管斜面正上方。 2、接种：将待藏菌种用些面接种法移种至标明菌名的相应试管斜面上。 3、培养：细菌置37℃恒温培养15～24h，酵母菌置28～30℃恒温培养36～60h，放线菌和丝状真菌置28℃培养4～7d。 4、收藏：为防止棉塞受潮长杂菌，管口棉花应用牛皮纸包扎或用熔化的固体石蜡熔封棉塞后置4℃冰箱保存。保存温度不宜太低，否则会因结冰脱水而加速菌种的死亡。 （二）沙土管或硅胶管保藏法 本法主要适用保藏产芽孢菌及形成孢子的霉菌与放线菌。是指把菌接种到如土壤、细沙、硅胶、滤纸片、麸皮等适当载体上后于干燥条件下进行保藏的方法。主要适于细菌芽孢和霉菌孢子。细菌芽孢用沙土管保藏，霉菌孢子多用麸皮管保藏。沙土管保藏操作步骤如下： 1、处理沙土：取河沙经60目筛子过筛以除去大的颗粒，用10%HCL浸泡（用量以浸没沙面为度）2～4h（或煮沸30min）以除去有机质，然后倒去盐酸，用流水冲洗至中性，烘干或晒干备用。另取非耕作层瘦黄土（不含有机质）风干、粉碎，用100～120目的筛子过筛备用。 2、装沙土管：将沙与土按2：1或4：1（W/W）比例混合均匀，装入试管（10mm×100 mm）中，装置约1cm高，加棉塞后用高压蒸汽灭菌（121℃灭菌30min）。灭菌后取少许置于牛肉膏蛋白胨或麦芽汁培养液中，在合适的温度下培养一段时间确证无菌生长才能使用。 3、制备菌液：吸3ml无菌水至斜面菌种管内，用接种环轻轻搅动，洗一下孢子制成孢子悬液。 4、加孢子液：吸取上述孢子液0.1～0.5ml于每一沙土管中，加入量以湿润沙土达2/3高度为宜。 5、干燥：将含菌的沙土管放入干燥器中，干燥器内用培养皿盛P2O5（或变色硅胶）做干燥剂，再用真空泵抽气2～4h以加速