第2次实验综述.doc

实验二 微生物的人工培养 一、培养基的制备及灭菌（讲解） （一）基本原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。 各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用高氏I号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。另外还有固体、液体、加富、选择、鉴别等培养基之分。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。它在96℃以上熔化成液体，而在45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。 培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的pH偏酸；细菌、放线菌的pH为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的pH值调到一定的范围。 1．牛肉膏蛋白胨培养基配方 牛肉膏 0.3 g 蛋白胨 1.0g NaCl 0.5g 水 100mL pH 7.4~7.6 2．高氏I号培养基配方 可溶性淀粉 2g NaCl 0.05g KNO3 0.1g K2HPO4·3H2O 0.05g MgSO4·7H2O 0.05g FeSO4·7H2O 0.001g 琼脂 1.5—2.5g 水 100mL pH 7.4~7.6 3．马铃薯培养基配方 马铃薯（去皮） 20g 葡萄糖（或蔗糖） 2g 琼脂 1.5~2.5g 水 100ml 自然pH 4．察氏培养基配方 蔗糖 3g NaNO3 0.2g K2HPO4 0.1g KCl 0.05g MgSO4·7H2O 0.05g FeSO4·7H2O 0.001g 琼脂 1.5~2.5g 蒸馏水 100ml （二）操作步骤 1．牛肉膏蛋白胨培养基配制方法 （1）称量：按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可按在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 （2）溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时．需不断搅拌．以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。 （3）调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/LHCL进行调节。 对于有些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行。 pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整PH。 （4）加塞 图1 棉塞的制作 培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等），棉塞的作用有二：一方面阻止外界微生物进入培养基，防止由此而引起的污染；另一方面保证有良好的通气性能，使培养在里面的微生物能够从外界源源不断地获得新鲜无菌空气。因此棉塞质量的好坏对实验的结果有着很大的影响。一只好的棉塞，外形应象一只蘑菇，大小、松紧都应适当。加塞时的棉塞的总长度的3/5应在口内，2/5在口外。 （4）包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 （5）灭菌 将上述培养基以0.103MPa，121℃，20min高压蒸气灭菌。 高压蒸汽灭菌法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。 ①加水。将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适