03.第三章核酸结构的功能课稿.pptVIP

(一) 真核生物mRNA一级结构特点 1.5′末端有帽子结构：m7GpppN 2.3′末端有尾巴结构：多聚腺苷酸(polyA) 一、mRNA的结构与功能 3.中间为编码区 7－甲基鸟苷三磷酸 帽子结构 多聚A尾结构 O O CH2 O OH + N HN N O H2N N CH3 O OH H2C O- O P O O P O- O P 鸟嘌呤 O O- O P O O AAA-OH 3/ AUG GUG······GCGAGGTGTATTGA······ UAA AAAA ······An m7Gpppp 5/帽子结构 编码区 3/多聚A尾 (一) tRNA的一级结构特点 1.核苷酸数量为70~90个左右。 2.含 10~20% 稀有碱基，如 DHU、 ?、I、mG、mA等。 3. 3′末端为 — CCA-OH。 二、tRNA的结构与功能 (二) tRNA的二级结构 氨基酸臂 额外环 OH ACCAGAGGGC CCCCC GCAAG CCG CUCUCGUA U C TΨ C C GGGGG GGC A A G m D D G G D D D A A C A G U U A A A A ψ GUUC C D m A A C A TΨ环 DUH环 反密码环 反密码子 tRNA的二级结构模型—— 三叶草形 结构特点： 单链局部环状双链 结构特点： 四臂四环（A-U，C-G） 氨基酸臂，3’末端-CCAOH为携带氨基酸的位置 反密码环，顶端三个碱基组成反密码子 DHU环，含有两个DHU TψC环，含TψC序列 2. tRNA的三级结构模型—— 倒L形 (二) rRNA由单链卷曲构成的多茎环结构。 三、rRNA的结构与功能 (三)rRNA参与组成核糖体的大、小亚基，作为蛋白质生物合成的场所。 (一) rRNA占总RNA的80％以上。 (四)根据沉降系数，rRNA在原核生物中有 5S,23S,16S 三种；在真核生物中有 5S,28S,5.8S,18S四种。 rRNA 四、核内小RNA 概念： 五、核酶 概念： 核酶：四膜虫 rRNA自我剪切 核酸是含磷酸和碱基的两性电解质，通常表现为较强的酸性。可用电泳和离子交换分离纯化核酸。 在碱性条件下，RNA不稳定，可在室温下水解。利用这个性质可以测定RNA的碱基组成，也可清除DNA溶液中混杂的RNA。 核酸是线性的大分子，其在溶液中的粘度很高。RNA分子比DNA短，在溶液中的粘度低于DNA。 第四节 核酸的理化性质 (The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid) 一、核酸的一般性质 二、紫外吸收 (一) 由于嘌呤和嘧啶中含有共轭双键，核酸在260nm处有最大吸收峰。 碱基的紫外光谱 240 250 260 270 280 波长(nm) 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 分子消光系数 AMP GMP UMP CMP dTMP 1. DNA或RNA的定量 A260=1.0相当于： 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: A260/A280 = 1.8 RNA纯品: A260/A280 = 2.0 (二) A260的应用 三、DNA的变性、复性与分子杂交 (一)变性 (denaturation) 1.概念 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。本质是双链间氢键的断裂。 3.变性后其他理化性质变化 ① A260增高 ② 浮力密度升高 ③ 粘度下降 ④ 酸碱滴定曲线改变 ⑤ 比旋度下降 ⑥ 生物活性丧失 (1)理化性质变化 2.因素 强酸，强碱，高温，高压，变性试剂如尿素以及某些有机溶剂如乙醇等。 加热 核酸的变性 (2)增色效应： 核酸变性时其溶液A260增高的现象。 (3)Tm：紫外光吸收值达到增加值的50%时的温度称为DNA的解链温度(melting temperature, Tm)。 影响因素：Tm大小与DNA的GC含量成正比。 解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度为横坐标，以吸光度A260为纵坐标作图，所得的曲线称为解链曲线。 Tm 76 80 84 8