血清总蛋白、白蛋白测定（serumtotalprotein、albumin.ppt

（二）电泳法 醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳。 特异性高，准确性不够，操作烦琐费时，且不宜用自动生化分析 （三）染料结合法 根据白蛋白结合外源性染料的能力比球蛋白大，故在不分离白、球蛋白的条件下用染料直接测定白蛋白。 有干扰，但灵敏度高、操作简便、重复性好，自动生化分析仪常用的方法。 * *  血清总蛋白、白蛋白测定（Serum total protein、Albumin test） 临床生物化学：  是研究机体健康和疾病的生物化学过程。测定体液或组织中的成份以提供对疾病的诊断、治疗和预防。 所用样品： 血液（血清/血浆）、尿液、脑脊液及体液 测定方法： 凯氏定氮法、双缩脲法、酚  试剂法、紫外分光光度法、染料 结合法、比浊法等。 总蛋白测定（一）、?? 凯氏定氮法 历史悠久，它是根据蛋白质平均 含氮量16%来计算蛋白质浓度的。 结果准确，但方法复杂 标化血清 检验其他方法 （二）、?? 双缩脲法 蛋白质中的肽键在碱性环境中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性环境中与铜离子作用产生紫红色络合物的反应相似，故称为双缩脲反应。 简单、精密、准确，为临床首选的常规方法，但灵敏度稍差。 （三）、?? 酚试剂法 运用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基能还原磷钨酸-磷钼酸试剂生成钼蓝来测定蛋白质的浓度。 改良法：在酚试剂中加入碱性铜离子。集中了双缩脲法和酚试剂法的优点 灵敏度高，但受许多还原物质的干扰，限制了它在临床上的应用。 （四）、?? 紫外分光光度法 蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处有一吸收峰，可用于蛋白质含量的测定。 准确性差，但因未加任何试剂和处理，可保留其生物活性且可回收全部蛋白质，故可用于较纯的酶和免疫球蛋白测定。 （五）?? 染料结合法 在酸性环境下，蛋白质分子带正电，可与带负电的染料结合产生颜色而测定之。 重复性好、灵敏度高，BCG 法特异性不高。 （六）?? 比浊法 某些酸（如三氯醋酸、磺基水杨酸）能与蛋白质结合产生微细沉淀，测定悬浮液的浊度即可求得蛋白质的含量。 简单、试剂易得，但影响因素太多。 血清总蛋白双缩脲测定法一、原理：蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性环境中能与铜离子作用产生紫红色络合物。 此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性环境中与铜离子作用产生紫红色络合物的反应相似，故称为双缩脲反应。 颜色的深浅在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量 郎伯-比耳定律：——溶液的吸光度与溶液浓度成正比  A1 = lgI0 / I = K1C1L1， A2 = lgI0 / I = K2C2L2  由于 分析物质相同，处理一样，比色皿也相同， 故 A1 / A2 = C1 / C2，  则 C1 = × C2  A1 A2 二、主要试剂： 双缩脲试剂（ NaOH 、硫酸铜、  酒石酸钾钠、碘化钾） 蛋白标准（60 g/L） 三、操作步骤加入物（ml） B S×2 U×2血清 / / 0.05标准液 / 0.05 /双缩脲试剂 3.0 3.0 3.0  混匀，37℃，10分钟，540nm处比色，1cm光径比色杯，B管调零 注： 1.非严重黄疸、脂血及高脂血 症血清不用做血清自身对照管。 2.可以用蒸馏水调零，目的是检  验各个试剂的好坏 四、结果 Au  血清总蛋白（g/L） = —— X 60  As  五、正常参考范围 60-80g/L 六、临床意义1、? 总蛋白浓度升高（1）蛋白质合成增加：大多见于多发性  骨