第二次课第二章_DNA重组的克隆操作试卷.ppt

基 因 工 程 GENE ENGINEERING 2 DNA重组克隆的单元操作 绝大多数分子克隆实验所使用的载体是DNA双链分子，其功能是： （1）为外源基因提供进入受体细胞的转移能力。 （ 2）为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力。 （ 3）为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力。 2.1 DNA重组的载体 基因工程载体必需具备的4个基本条件 具有对受体细胞的可转移性或亲和性，以提高载体导入受体细胞的效率。 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。 具有多种单一限制性内切酶位点。 具有合适的选择标记基因。 2.1 DNA重组的载体 2.1 DNA重组的载体 2.1.1 质粒载体 质粒（ Plasmid）是一类存在于细菌和真菌细胞中能独立于染色体 DNA而自主复制的共价、闭合、环状 DNA分子（ Covalently Closed Circular DNA），也称为 cccDNA，其大小通常在 1-100kb范围内。 2.1 DNA重组的载体 2.1.1 质粒载体 2.1.1.1 质粒的基本特性 1、自主复制性 已知的绝大多数质粒都是双链闭合环状DNA分子。除了酵母的杀伤质粒是一种RNA分子外，其他已知的所有质粒无一例外地都是DNA分子。 质粒 DNA含有自己的复制起始位点（ Origin，简称 ori）以及