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番茄红素分离纯化研究 　　摘要：以5%番茄红素粉为原料，研究了应用不同型号树脂对番茄红素进行分离纯化的效果。结果表明，不同型号树脂对番茄红素的分离纯化效果不同，其分离纯化效果顺序为X-5AB-8S-8离子交换树脂，最适静态吸附样液浓度为0.03 g/L、最适静态解吸时间为1 h、最适动态上样速度为2 BV/h、最适洗脱剂为乙酸乙酯。番茄红素经X-5吸附后，以乙酸乙酯为洗脱剂，可将番茄红素浓缩5.9倍，具有良好的富集纯化效果。 　　关键词：番茄红素；分离纯化；大孔树脂 　　中图分类号：TS202.3；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）18-4787-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.038 　　番茄红素是人类自身不能合成，而由植物和微生物合成的一种天然色素，是目前在自然界的植物中被发现的最强抗氧化剂之一，对人体具有预防癌症、延缓衰老、保护心脑血管等功用[1]，人们主要通过食用番茄摄入番茄红素。 　　当前，人们常见以氯仿、丙酮、正乙烷等有机溶剂作为提取剂从番茄果实中提取番茄红素[2]，再采用皂化纯化法、溶剂纯化法、HPLC法、重结晶法和柱层析法等方法进一步分离纯化番茄红素。本试验拟以5%番茄红素粉为原料，研究不同型号树脂对番茄红素的分离与纯化效果，为进一步研究利用番茄红素提供科学根据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验所用材料为番茄红素粉（5%），购自陕西森弗高科实业有限公司；大孔吸附树脂（X-5、AB-8、S-8、离子交换树脂）。 　　1.2 试剂与仪器 　　试验所用试剂主要有：乙酸乙酯（AR）、丙酮（AR）、石油醚（AR）、乙醇（95%）、去离子水（自制）。 　　试验所用主要仪器：VIS-7220型可见分光光度计，北京瑞利分析仪器公司；AL204型电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；层析柱（1.6 cm×30 cm）；旋转蒸发器；真空泵；烘箱；HL-2B型数显恒流泵；电脑全自动部分收集器。 　　1.3 方法 　　1.3.1 番茄红素提取液制备 准确称取番茄红素粉（5%）0.05 g，用乙酸乙酯溶解后，定容至500 mL。 　　1.3.2 最大吸收波长的确定 将所制备的番茄红素提取液稀释一定倍数，选用1 cm比色皿在波长为400～700 nm进行可见光吸收光谱扫描。 　　1.3.3 大孔吸附树脂的预处理 将树脂用清水漂洗干净后，用80%乙醇浸泡24 h以除醇溶性有机物，滤干，再用蒸馏水洗涤，滤干，用2 mol/L HCl溶液浸泡4 h，再用蒸馏水洗涤至中性，滤干，用2 mol/L NaOH溶液浸泡4 h，再用蒸馏水洗涤至中性，备用。 　　1.3.4 静态分离纯化条件筛选 　　1）吸附剂的选择。取已经活化的X-5、AB-8、 S-8、离子交换树脂5.0 g 于250 mL锥形瓶中，分别加入30 mL番茄红素提取液避光振荡吸附4 h，测定A502 nm[3]，了解各树脂对番茄红素的吸附速度，确定最佳吸附时间和吸附剂。 　　2）样液浓度的选择。取已经活化的X-5 5.0 g，加入不同浓度的番茄红素提取液避光振荡吸附4 h，测定A502 nm，计算吸附率，确定最佳样液浓度。 　　3）解吸时间的选择。各大孔树脂吸附完成后，倒去上层清液，加入乙酸乙酯40 mL，25 ℃水浴振荡3 h，每隔0.5 h取解吸液分别稀释适当倍数后，测定A502 nm并计算解吸率。 　　1.3.5 动态分离纯化的选择 　　1）上样速度的选择。取已经活化的X-5 5.0 g装填层析柱，取稀释一定倍数的番茄红素提取液30 mL，以0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 BV/h速度上样，10 min后测定流出液的吸光度A502 nm，确定最佳上样速度。 　　2）洗脱剂的选择。取稀释一定倍数的番茄红素提取液以2 mL/min速度上样，分别以95%乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，洗脱液连接自动部分收集器，速度为1 min/管，每隔一管测定A502 nm，绘制洗脱曲线。 　　1.3.6 吸附及解析效果评价[4] 　　吸附率E=■×100% 　　解吸率D=■×100% 　　式中，A0为吸附前溶液的吸光度；Ae为吸附完成后溶液的吸光度；An为洗脱液的吸光度。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同树脂对番茄红素的静态吸附曲线 　　X-5、AB-8、S-8、离子交换树脂中分别加入30 mL番茄红素提取液避光振荡吸附4 h，每隔0.5 h测定提取液的A502 nm，结果如图1所示。由图1可见，X-5、AB-8、S-8、离子交换树脂中分别加入30 mL番茄红素提取液避光振荡吸